清脂通脉颗粒对动脉硬化模型大鼠血脂及PPARγ、LXRα、CD36表达影响的研究

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ws1984003
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目的:观察清脂通脉颗粒对实验性动脉粥样硬化模型大鼠的各项血脂指标的水平含量,研究对比选取具有最佳疗效的药物剂量配比。进一步观察研究清脂通脉颗粒对PPARγ和LXRα和CD36在心脏和肝脏中的表达与血脂代谢水平之间的联系,探讨其治疗动脉粥样硬化的作用机理。材料与方法:1.本实验选取的实验动物为SPF级SD雄性大鼠144只,实验过程中动物的分组都采取随机数字表的方法,将144只大鼠,均匀随机的分为12组(正常组、模型组、中药组10组),每组中放入12只。使每组大鼠在相同实验条件下,经适应性饲养一周后,给除正常组外大鼠进行AS造模,造模方式采用腹腔注射维生素D3(60万IU/kg)和复合高脂饲料进行喂养,同时给正常组内的大鼠腹腔注射等量的生理盐水和普通饲料喂养。2.经过9周实验后,对禁食12h后大鼠腹主动脉血液进行抽取,进而检测各组中大鼠血清的胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)和高密度脂蛋白(HDL-C)的水平含量。在经过大鼠被完全麻醉后,取肝脏及心脏组织冷冻备用。3.对12组的实验数据应用SPSS17.0软件进行统计分析,各组间的计量资料采用单因素方差分析,数据以均数±标差(x±s)表示,结果P>0.05无统计学意义,P<0.05为差异有统计学意义,P<0.01表示差异显著。4.应用实时荧光定量PCR和Western blot法检测(正常组、模型组、最优剂量组)大鼠心脏与肝脏组织中PPARγ、LXRα和CD36的基因表达水平及蛋白表达水平研究将实验数据进行统计学分析。同时用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清中apoAI、ox-LDL含量并对实验数据进行统计学分析。结果:1.各项大鼠血脂水平含量检测结果:与正常组比较,模型组TC、TG、LDL-C含量均存在显著上升(P<0.01),HDL-C水平含量明显下降(P<0.01)。相比模型组,中药组3、7、8、9、12组的TC含量出现了明显下降(P<0.05),除第五组以外的中药组TG含量都明显降低(P<0.05),5、6、8、11、12组的HDL-C含量明显升高(P<0.05),3、7、8、10、12组的LDL-C含量明显下降(P<0.05);其余组TC、TG、LDL-C水平含量虽然略有下降、HDL-C呈现上升,但没有具备统计学意义(P>0.05)。所以综合比较后发现8、12组在四项指标中都具有统计学意义,选为最优剂量组进一步实验。2.ELISA法检验血清中apoAI、ox-LDL含量经统计结果分析得出,与正常组比较,模型组血清内apoAI含量显著下降(P<0.01);同模型组比较,中药组组8与组12血清内apoAI的含量显著升高(P<0.01)。与正常组比较,模型组血清内ox-LDL含量显著上升(P<0.01);同模型组比较,中药组组8与组12血清内ox-LDL的含量明显降低(P<0.05)。3.根据实时荧光定量PCR说明,同正常组比较,模型组中在PPARγ、LXRα在心脏和肝脏组织中的mRNA的表达均明显降低(P<0.05);CD36在心脏与肝脏组织中含量明显升高(P<0.05)。同模型组比较,中药组(8组和12组)PPARγ、LXRα在心脏和肝脏组织中的mRNA表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,中药组CD36在肝脏组织中的mRNA表达显著下降(P<0.01),CD36在心脏组织中的mRNA表达都有下降,但8组不具备统计学意义(P>0.05),第12组有统计学意义(P<0.05)。4.根据Western-blot结果说明,同正常组比较,模型组内PPARγ、LXRα、在心脏和肝脏中的蛋白表达含量明显降低(P<0.05);CD36在心脏与肝脏组织中含量明显升高(P<0.05)。通过模型组与中药组(8组与12组)比较PPARγ在心脏和肝脏中的蛋白表达升高(P<0.05);LXRα在肝脏组织中的蛋白表达显著升高(P<0.01),LXRα在心脏组织中虽然都有提高,但是8组有统计学意义(P<0.01)而12组不具备统计学意义(P>0.05);与模型组比较,中药组CD36在心脏和肝脏组织中的蛋白表达下降(P<0.01)。结论:1.经过各项血脂指标分析证明,第8组和第12组药物剂量降脂效果相对优于其他中药剂量组。2.通过经典造模法(高脂饲料喂养大鼠及维生素D3腹腔注射),发现模型组血清含量显著升高的有TC、TG、LDL-C及ox-LDL,含量显著降低的为HDL-C,说明高脂血症动脉硬化大鼠模型造模成功。3.清脂通脉颗粒可以使动脉粥样硬化模型大鼠血清中apoAI的含量上升;血清中ox-LDL的含量下降。4.清脂通脉颗粒可以使动脉粥样硬化模型大鼠的心脏和肝脏组织中PPARγ、LXRα的mRNA和蛋白的表达升高;CD36的mRNA和蛋白的表达降低。5.清脂通脉颗粒调控促胆固醇的逆向转运是由于升高PPARγ、LXRα的mRNA及蛋白的表达。6.清脂通脉颗粒能够降低CD36的mRNA和蛋白的表达减少氧化型脂质的内吞作用,减少泡沫细胞的形成。7.清脂通脉颗粒防治动脉粥样硬化的作用机制,可能是通过升高心脏和肝脏组织中的PPARγ、LXRα的mRNA及蛋白的表达,使血液中apoAI的含量上升,促使HDL水平上升,促进游离胆固醇的转运、抑制胆固醇的吸收及加快胆固醇的代谢功能,通过降低CD36的mRNA及蛋白的表达,及降低体内ox-LDL的含量下降,减少脂质内吞作用,可以减少泡沫细胞产生,促进脂质外流。从而延缓动脉粥样硬化的形成与发展。
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