新疆黑果小檗根部成分分析及体外抑菌活性初步研究

来源 :新疆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:anlyok
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目的:对新疆黑果小檗根部化学成分进行初步定性定量分析。在此基础上,对根皮5%硫酸提取物进行分离纯化、结构解析及含量测定,并研究根部化学成分的体外抑菌活性。方法:1.化学成分初步研究:(1)采用植物未知化学成分系统预试验方法,对黑果小檗根皮和根木质部不同溶剂提取物进行化学成分初步定性研究。(2)对比研究紫外分光光度法和酸性染料比色测定总生物碱含量的区别,并对根皮和根木质部中总生物碱含量进行初步测定。(3)用响应面法考察并优化根皮总生物碱的提取工艺。2.用5%硫酸冷浸提取黑果小檗根皮,滤液通过阳离子交换树脂、硅胶柱层析等分离纯化方法,结合NMR、ESI-MS等分析方法,解析单体化合物的结构,并采用HPLC法对其进行含量测定。3.采用牛津杯法、倍比稀释法及OD值测定法,初步研究根皮5%硫酸提取物及其95%乙醇部位、70%乙醇部位、水部位、单体化合物和根木质部的上述部位对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌、乳酸杆菌和双歧杆菌的体外抑菌活性。结果:1.(1)黑果小檗根皮和根木质部中都含有氨基酸、蛋白质、生物碱、糖及苷类、有机酸、皂苷类、黄酮类、酚类和鞣质、三萜、内酯类等多种物质。(2)紫外分光光度法测得样品总生物碱含量(平均值2.94%)均高于酸性染料比色法测得总生物碱含量(平均值1.42%)。采用紫外分光光度法测得根皮和根木质部中总生物碱含量为:(根皮/根木质部)酸提物(4.52%/3.96%)>95%乙醇提取物(2.89%/2.88%)>水提取物(1.74%/2.28%)>丙酮提取物(0.83%/1.10%)>乙酸乙酯提取物(0.28%/0.13%)>石油醚提取物(0.07%/0.08%)。(3)根皮总生物碱的最优提取条件为乙醇体积分数50%,料液比1︰51(g︰mL),提取次数3次,提取温度80℃,提取时间2h。2.从本植物根皮中首次分离得到反式阿魏酸,在5%硫酸提取物中含量为0.59%。3.(1)根皮5%硫酸提取物及其95%乙醇部位、根木质部5%硫酸提取物及其95%乙醇部位对四种致病菌有抑制作用(阳性结果),其余样品均显示阴性结果。(2)根皮5%硫酸提取物对四种致病菌的MIC均为2.02mg·mL-1,其95%乙醇部位对大肠杆菌的MIC为2.13mg·mL-1,对粪肠球菌的MIC为4.25mg·mL-1,对铜绿假单胞菌的MIC为8.50mg·mL-1,对金黄色葡萄球菌的MIC为1.06mg·mL-1;根木质部5%硫酸提取物对四种致病菌的MIC均为1.90mg·mL-1,其95%乙醇部位对大肠杆菌和粪肠球菌的MIC均为5.05mg·mL-1,对铜绿假单胞菌的MIC为20.19mg·mL-1,对金黄色葡萄球菌的MIC为2.53mg·mL-1。(3)根皮5%硫酸提取物的水部位(20.68-10.34mg·mL-1)、根木质部5%硫酸提取物的95%乙醇部位(2.53-10.10mg·mL-1)及水部位(0.97-7.73mg·mL-1)对乳酸杆菌的生长有促进作用,其余样品均显示抑制作用;根木质部5%硫酸提取物70%乙醇部位(40.06mg·mL-1)、根皮5%硫酸提取物70%乙醇部位(2.91-11.63mg·mL-1)以及水部位(20.68mg·mL-1)对双歧杆菌的生长有促进作用,其余样品均显示抑制作用。结论:1.(1)根皮和根木质部中化学成分种类基本相同。其中生物碱含量较高,若以生物碱作为有效成分时,初步推断根木质部有作为用药部位的可能性。(2)采用响应面法优化的根皮总生物碱提取工艺,通过三次验证试验,总生物碱提取率为4.01%,RSD=1.12%,理论值与实际值的误差为0.98%,说明优化的工艺稳定可行,可为黑果小檗根皮总生物碱后续研究提供实验基础。2.黑果小檗根皮5%硫酸提取物中含有反式阿魏酸,含量为0.59%。3.根皮和根木质部5%硫酸提取物及其不同溶剂部位对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、粪肠球菌有不同程度的抑菌作用,对双歧杆菌和乳酸杆菌有一定的促增生作用。初步推断,若用于治疗由菌群紊乱引起的肠道疾病时,黑果小檗根木质部也可用于入药。
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