EGCG对非酒精性脂肪肝大鼠的调脂保肝作用研究

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非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)是常见的弥漫性肝病之一;是一种无过量饮酒史,但与遗传、环境、代谢应激相关的疾病;临床表现为肝实质细胞脂质贮积和脂肪变性,与脂质代谢紊乱等代谢综合症密切相关。茶叶中表没食子酸儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate, EGCG)是儿茶素组分中含量最高的一个组分,被认为是茶叶中主要的活性成分,目前已有很多研究表明EGCG与茶叶的多种功效有关,如抗氧化、抗癌、抗辐射、减肥降脂等,但其机制却并不明显。本论文以EGCG作为研究材料,研究EGCG对大鼠非酒精性脂肪肝调脂保肝的作用研究。1EGCG对非酒精性脂肪肝大鼠的调脂保肝作用利用高脂饲料(High-fat diet)喂养斯普拉-道来氏(Sprague-Dawley, SD)大鼠的方法建立大鼠非酒精性脂肪肝模型,通过观察不同浓度的EGCG水溶液灌胃35天后,大鼠的体重、血脂、肝脏中抗氧化指标、病理变化几个指标,来探讨EGCG对非酒精性脂肪肝大鼠调脂保肝的效果。实验结果表明:高脂饲料喂养SD大鼠28天后,模型构建成功。再灌胃不同浓度的EGCG35天后,EGCG保护组大鼠体重相比模型组均有不同程度的下降。与模型组大鼠相比,EGCG保护组大鼠血液中TG、TC、LDL-C下降,HDL-C上升,以EGCG高剂量组最为明显。HE染色结果显示,EGCG保护组大鼠肝脏中脂肪空泡减少,水肿、验证侵润症状也有改善;与此同时,EGCG保护组大鼠肝脏中抗氧化指标相对模型组大鼠均有改善,血液中AST、ALT下降,且呈剂量依赖关系,以EGCG高剂量组最好。2EGCG调控非酒精性脂肪肝大鼠的肝脂质代谢基因表达因为EGCG高剂量组的效果相对其他组要好,切取EGCG高剂量组大鼠的肝脏,用实时荧光定量PCR技术(Real-time fluorescent quantitive PCR)检测了ACAT1、 DGAT2、LCAT、UCP2、MCD、CPT-1的表达情况。实验结果表明:相对模型组,EGCG可以下调LCAT、ACAT1、DGAT2及UCP2的表达,上调MCD、CPT-1的表达。3EGCG改善大鼠非酒精性脂肪肝的蛋白组学研究以正常对照组、模型组、EGCG高剂量组大鼠肝脏为材料,采用双向电泳技术(Two-dimensional Electrophoresis,2-DE)对三组中差异表达的蛋白进行研究。实验中建立了重复性较好双向电泳技术体系,并取得了可以进行进一步分析的图谱。采用PDQuest软件对获得的图谱进行分析,找到了各组大鼠肝脏中稳定表达,其表达丰度改变大于1.5倍的差异表达蛋白点共34个,其中上调差异蛋白质点13个点,下调差异蛋白质点21个。对其中的13个蛋白质进行了鉴定,有10个鉴定成功,分别涉及脂质的合成、转运和氧化。
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