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目的1.研究Siah1和Numbl在胶质瘤组织中的表达情况,分析Siah1和Numbl异常表达与胶质瘤发生发展的关系。2.研究胶质瘤细胞增殖和迁移过程中Siah1和Numbl蛋白的表达变化及其机制,探讨Siah1和Numbl在此过程中的作用。方法1.采用western blot技术检测不同级别胶质瘤新鲜组织中Siah1和Numbl的表达情况;运用免疫组化方法检测92例胶质瘤组织石蜡切片中Siah1和Numbl的表达情况,并结合胶质瘤临床病理资料分析Siah1和Numbl与胶质瘤患者的年龄、性别、KPS评分、肿瘤位置、手术切除范围以及肿瘤分级等因素之间的关系,并对其进行随访,应用Kaplan-Meier法分析Siah1和Numbl与胶质瘤预后的关系。构建Siah1、Numbl过表达载体,将Siah1和Numbl转染入U87-MG细胞检测Siah1和Numbl对胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。2.通过免疫共沉淀方法证明Siah1和Numbl体外的相互作用;通过免疫荧光检测两者在U87-MG细胞和U251细胞内的共定位;构建Siah1的截短突变体,检测它们相互作用的区段。3.通过将myc标记的Siah1、HA标记Numbl转染胶质瘤细胞,检测Siah1和Numbl的相互作用对Siah1的作用底物β-catenin降解的调节作用。结果1.Western blot分析显示,Siah1和Numbl在胶质瘤组织中的表达随级别增高而降低。免疫组化结果显示,Siah1和Numbl的表达与胶质瘤组织学分级之间有统计学意义(P值分别为0.028、0.022)。Kaplan-Meier分析显示在胶质瘤中Siah1和Numbl的低表达与患者较差的生存预后显著相关(P均<0.001)。2.通过构建Siah1和Numbl的过表达载体并转染入U87-MG细胞,结果显示单独过表达Siah1和Numbl对胶质瘤细胞增殖和迁移有抑制作用,共同转染过表达Siah1和Numbl时对胶质瘤细胞增殖和迁移的抑制作用更明显。3.体外HEK293T细胞及胶质瘤细胞中的免疫共沉淀以及免疫荧光显示Siah1和Numbl存在相互作用;通过截短突变检测到两者的相互作用区域发生在Siah1底物结合区SBD段;在胶质瘤细胞中检测到Siah1和Numbl的相互作用协同促进β-catenin的降解。结论1.Siah1和Numbl在胶质瘤中随着级别的升高表达降低,低表达Siah1和Numbl的患者预后较差,Siah1和Numbl的表达呈正相关;2.Siah1和Numbl抑制胶质瘤细胞的增殖与迁移,协同作用比单独对增殖和迁移的作用更加明显;3.Siah1和Numbl存在相互作用,两者协同作用更能降低作用底物β-catenin的量。