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幽门螺杆菌(Helicobater pylori,HP)感染是慢性胃炎和消化性溃疡主要的发病原因之一,与胃癌发生发展密切相关,WHO已将其列为I类致癌因子。目前主要采用铋剂和(或)质子泵抑制剂加两种抗生素的三联、四联疗法治疗HP感染,但易引起患者胃肠道菌群失调、霉菌感染及肝肾功能损害等副作用,逐渐造成治疗依从性差,并诱发HP的耐药而成为一个社会问题。面对HP防治的困境,研究者希望寻找到一种作用特异、直接、长久,无毒副作用的新疗法,而微生态制剂通过多种途径拮抗病原菌,减少了耐药性的发生,为控制细菌感染性疾病提供了新的途径。嗜酸乳杆菌是人体微生态环境中的主要微生物之一,与人类健康息息相关,近年来的研究表明它还可以对HP在胃内的定植、黏附和生长具有抑制效应,这一发现为HP的防治带来了新的希望。因此本研究依据现有文献报道,选择能广泛定植于胃肠道的乳酸杆菌属的嗜酸乳杆菌,作为拮抗HP益生菌,作了如下工作:1、抗HP嗜酸乳杆菌的相关生物学特性及其毒理学安全性实验研究本研究选用从体检健康成人消化道分离鉴定出具有较强抑制HP效应的嗜酸乳杆菌L4和L6作为研究对象,观察发现这2株抗Hp嗜酸乳杆菌在体外模拟胃环境中,表现出对胃内强酸环境具有较强的耐受性,在体外模拟十二指肠环境中,表现出对十二指肠的高胆盐环境具有较强的耐受性。以同位素示踪法证实L4和L6抗HP嗜酸乳杆菌可在胃内长时间存留,提示其可被用于进一步的生态治疗研究。以昆明种小白鼠进行L4和L6经口急性毒理实验,结果表明以1012CFU/ml的最大浓度,0.5ml/10g的灌饲容积1次给小鼠灌饲后,14d内未出现中毒反应,提示L4和L6无经口短期毒性效应。以Wistar大鼠进行L4和L6经口长期毒理实验,结果表明以108CFU/ml的细菌浓度,连续灌饲4个月,并继续观察2个月,均未出现中毒反应,提示L4和L6经口无长期毒性效应。2、抗HP嗜酸乳杆菌对HP与SCG-7901细胞黏附的抑制效应分析抗HP嗜酸乳杆菌L4和L6与SGC-7901细胞具有较强的黏附能力,当细菌浓度为1×109CFU/ml时黏附能力最强,活菌的黏附能力明显强于灭活菌。HP标准菌株SS1与SGC-7901细胞具有较强的黏附能力,当细菌浓度为1×109CFU/ml时黏附能力最强。抗HP嗜酸乳杆菌L4和L6对HP标准菌株SS1与SGC-7901细胞的黏附能力具有明显抑制效应。抗HP嗜酸乳杆菌L4和L6对HP标准菌株SS1诱导SGC-7901细胞分泌的IL-1β、IL-6和IL-8表现出抑制效应。3、抗HP嗜酸乳杆菌发酵乳效力稳定性及对C57BL/6小鼠HP感染的预防和治疗效应分析本研究室制备的抗HP嗜酸乳杆菌L6在发酵乳中可保持良好的生物学活性。抗HP嗜酸乳杆菌L6发酵乳被贮存21天内,都可保持较高的生存能力,可达到益生菌在食品中106CFU/ml的要求。预先给C57BL/6小鼠灌饲抗HP嗜酸乳杆菌L6发酵乳可以防止HPSS1在C57BL/6胃粘膜上的定植。HPSS1感染后再灌饲抗HP嗜酸乳杆菌L6发酵乳,可以减少C57BL/6胃粘膜上HP定植数量,并减轻HPSS1感染诱发的胃粘膜病理损伤。总之,本研究从抗HP嗜酸乳杆菌抑制HP的机理上作了初步研究,并对HP微生态制剂的研发作了相关的实验工作,为开发微生态活菌制剂来防治HP感染提供了理论基础。