乳腺癌是严重危害女性健康的恶性肿瘤之一，三阴性乳腺癌（Triple negativebreast cancer, TNBC）的重要特点就是缺乏孕酮受体（progesterone receptor）、雌激素受体（estrogen receptor）和人类表皮生长因子受体（human epidermalgrowthfactor receptor-2, HER2），而针对它们的内分泌治疗及靶向治疗无效，因此相对其他类型乳腺癌其预后差，生存期短。目前临床治疗上仍以化疗为主,多个研究表明，顺铂对三阴性乳腺癌化疗有效，提高三阴性乳腺癌对顺铂的化疗敏感性，能有效改善该类患者的预后。微小RNA（microRNA，miRNA）是一段长度约为20~22bpd大小的、基因遗传学高度保守的非编码RNA，具有复杂的生物学功能，已逐渐引起医学界的广泛关注。它能通过与靶基因3’端非翻译序列（untranslate region, UTR）的特异性结合来调控靶基因的降解或者表达，并在转录后水平基础上调控靶基因的功能。大量研究已证实miRNA的生物学功能与肿瘤的发生、发展和远处转移密切相关的。同时研究还发现miRNA不仅在肿瘤的发生、发展和转移过程中发挥重要作用，而且还参与肿瘤放化疗敏感性的调控。而最新研究表明miR-18b在乳腺癌细胞系中表达水平升高，并调节乳腺癌侵袭的相关基因，但miR-18b在乳腺癌的化疗过程中的生物学作用及其机制仍不清楚。程序性细胞死亡（Programmed cell death, PCD）与胚胎发育（morphogenesis）、机体稳态（homeostasis）和排除具有癌变倾向的细胞等生理活动密切相关。凋亡并不是生物体内唯一的程序性细胞死亡方式，自噬是独立于凋亡之外的另一种程序性细胞死亡方式，几年的研究显示当细胞处在缺氧状态下，细胞常自行吞噬长寿命蛋白和受损细胞器来获取生存的物质和能量，从而利于细胞在应激状态下存活。miRNA通过调控肿瘤细胞的凋亡（apoptosis）、自噬（autophagy）、衰老（senescence）和细胞周期阻滞（cell cycle arrest）等机制，发挥着促进癌症或者抑制癌症的双刃剑作用。miRNA通过以上机制来调节肿瘤的发生、发展和远处转移。miRNAs在乳腺癌、肺癌、甲状腺癌和肝癌等恶性肿瘤中有差异性表达，其生物学功能常被认为是“癌基因（oncogene）”和“抑癌基因（tumor suppressors）”，是一种重要的生物标志物。因此检测体内miRNA变化可对体内恶性肿瘤进行早期诊断、预后判断；干预miRNA可通过调节细胞凋亡及自噬等程序性细胞死亡，成为治疗恶性肿瘤的一种手段。miR-18b在多种乳腺癌细胞系中表达水平显著升高，多种研究表明，它是参与调节乳腺癌细胞浸润和远处转移的相关基因，然而，miR-18b在乳腺癌的化疗过程中发挥什么生物学作用和机制仍缺乏实验研究，它的众多生物学功能还需要继续研究探索。本实验研究旨在阐明miR-18b如何调节三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的化疗敏感性及其可能的作用机制。目的探讨miR-18b在三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂化疗敏感性中的作用及其可能的机制。方法采用生物信息学方法预测miR-18b的靶基因；用基因工程方法构建双荧光素酶表达载体；培养人乳腺癌细胞株细胞MDA-MB-231，冻存对数生长期的细胞。通过脂质体转染人工合成的mimic，转染至乳腺癌细胞，根据转染条件分为MDA-MB-231组、 MDA-MB-231+DDP组、 MDA-MB-231-NC组、MDA-MB-231-NC+DDP组、MDA-MB-231mimic组和MDA-MB-231mimic+DDP组，以Negative control（NC）作为对照，根据试剂盒逐步提取各组MDA-MB-231细胞中的miR-18b，应用（Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）法检测细胞组的miR-18b的表达水平变化；Western blot检测转染后ATM蛋白水平变化。用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8，CCK8)检测细胞的化疗敏感性。结果1. miR-18b靶基因的预测通过miRNA预测靶基因的生物信息学工具(PicTar、miRBase和Taregestscan）初步预测miR-18b的靶基因，即ATM可能为miR-18b靶基因。2. miR-18b在不同分组乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达情况与NC组相比，MDA-MB-231转染mimic组miR-18b表达升高20倍以上。mimic+DDP组与NC组相比，miR-18b表达水平升高60倍以上，差异具有统计学意义（p<0.001）。3.验证ATM为miR-18b靶基因1）.MDA-MB-231细胞中过表达miR-18b抑制ATM3’UTR载体荧光素酶活性过表达miR-18b后pMIR-ATM荧光素酶活性的相对值降到70%，说明miR-18b明显抑制了pMIR-ATM荧光素酶的活性。由此初步验证，ATM为miR-18b靶基因，并与ATM3’UTR序列的部分结合从而发挥调控作用。2）.过表达miR-18b抑制MDA-MB-231细胞中ATM蛋白的表达通过转染mimic在MDA-MB-231细胞中过表达miR-18b，与MDA-MB-231-NC组比较，MDA-MB-231mimic组细胞中的ATM蛋白水平明显降低（p<0.05）;与MDA-MB-231-NC+DDP组比较，MDA-MB-231mimic+DDP组细胞中的ATM蛋白水平也明显降低（p<0.05），由此证实过表达miR-18b抑制MDA-MB-231细胞中ATM蛋白的表达。进一步确定miR-18b是ATM的靶基因。4.过表达miR-18b对MDA-MB-231细胞化疗敏感性的影响与MDA-MB-231NC组比较，在不同浓度的DDP作用后，转染miR-18b mimic后的MDA-MB-231细胞生长抑制率均升高，即对DDP的化疗敏感性升高。结论miR-18b通过靶向调控ATM蛋白增强乳腺癌MDA-MB-231细胞对顺铂化疗敏感性。