【摘 要】
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目的:研究结肠癌转移相关基因1(metastasis associated in colon cancer1,MACC1)对人鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响,观察人鼻咽癌细胞过表达MACC1对细胞的增殖、迁移及侵袭的影响。方法:1.采用Western blot技术检测鼻咽癌5-8F、HNE-1、CNE-1、CNE-2细胞株中MACC1的蛋白表达水平。2.通过慢病毒转染技术建立一组过表达MACC1的
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目的:研究结肠癌转移相关基因1(metastasis associated in colon cancer1,MACC1)对人鼻咽癌细胞恶性生物学行为的影响,观察人鼻咽癌细胞过表达MACC1对细胞的增殖、迁移及侵袭的影响。方法:1.采用Western blot技术检测鼻咽癌5-8F、HNE-1、CNE-1、CNE-2细胞株中MACC1的蛋白表达水平。2.通过慢病毒转染技术建立一组过表达MACC1的CNE-2细胞株,筛选出稳定转染的细胞。3.实验分为三组:实验组(CNE-2 MACC1过表达稳定株组);阴性对照组(CNE-2转染空载体稳定株组);空白对照组(CNE-2空细胞组)。4.采用Q-PCR实验和Western blot实验检测三组细胞MACC1的表达水平。5.采用MTT实验观察各组细胞的增殖能力。6.采用Transwell迁移实验观察各组细胞的迁移能力。7.采用Transwell侵袭实验观察各组细胞的侵袭能力。结果:1.Western blot实验结果显示HNE-1细胞株表达MACC1的水平最高,CNE-1细胞株表达水平中等,CNE-2和5-8F细胞株未检测到MACC1的表达或表达量极低。2.慢病毒转染后,在倒置荧光显微镜下观察到实验组细胞有绿色荧光表达。3.Q-PCR实验结果显示,实验组细胞的MACC1 mRNA的表达量远高于对照组。4.Western blot结果显示,实验组细胞条带明显,有MACC1蛋白的过表达,而对照组细胞未见条带,提示MACC1无表达或表达量极低。5.MTT结果显示,实验组细胞在慢病毒转染后24h、48h、72h的增殖能力与对照组相比明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。6.Transwell迁移实验结果显示,培养24h后,实验组细胞的迁移数为(85±4)个,阴性对照组细胞的迁移数为(59±3)个,空白对照组细胞的迁移数为(58±4)个,实验组与对照组之间差异有统计学意义(P<0.05)。7.Transwell侵袭实验结果显示,培养24h后,实验组细胞的侵袭数为(81±4)个,阴性对照组为(42±3)个,空白对照组为(40±4)个,实验组与对照组之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MACC1的异常高表达会导致鼻咽癌CNE-2细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为增强,提示MACC1参与了鼻咽癌的増殖、侵袭、转移等肿瘤发生发展的过程。
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