肌酐是人体代谢的一种重要产物，一般通过肾脏的代谢排出体外。在临床测定中，血清中的肌酐浓度是一项判断肾功能的重要指标。目前肌酐的测定一般是用Jaffe法进行测定，该方法是基于化学反应基础上的，特异性差，血清中许多化学物质都能干扰测定结果，给疾病的正确诊断造成了困难。而酶促的催化反应比一般化学反应具有更高的专一性，因而近年来人们寄希望于研究开发出酶促肌酐的测定方法，以提高测定结果的可靠性。 本文分离筛选到一株产肌酐水解酶的菌株42-1，经鉴定为节杆菌属，研究了菌株的产酶发酵条件、酶的提取纯化方法及酶的性质。试验结果分述如下： 1．菌株的分离筛选及鉴定：经过富集培养和划线分离纯化后，得到7株产肌酐水解酶的菌，分别为菌株42-1、42-2、30-1、A₁1、SAO-C、SAO-I、SAO-S。通过产酶活性及酶热稳定性测定，菌株42-1表现较高的酶活性且所产的肌酐水解酶具有较好的热稳定性，因此确定菌株42-1为最佳产肌酐水解酶菌株。菌株42-1的形态学、生理生化及16S rRNA序列比对结果表明该菌为节杆菌（Arthrobacter sp.）。 2．菌株产酶条件：菌株42-1的最适产酶培养基为：肌酸，4g；酵母膏，7.2g；玉米浆，4.8g；葡萄糖，10g；K₂HPO₄3H₂O，2g：KH₂PO₄，0.5g；MgSO₄7H₂O，0.1g；KCI，0.0005g；MnCl₂，0.1g；水，1000mL；pH7.5。最适产酶条件为：培养温度20℃，100mL三角瓶装15mL培养基，于120rpm转速下培养36h。 3．酶的提取纯化：肌酐水解酶经55℃水浴保温30min去除热不稳定蛋白后，在硫酸铵饱和度为30～50％之间大部分沉淀下来，经过DEAE-Cellulose离子交换、Toyopearl HW-65C疏水层析后，酶提纯了145倍，比活力达209U／mg。聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）显示为一条带，SDS-PAGE测定亚基分子量为33 700Da。 4．酶的性质：酶的最适pH为7.5，最适作用温度为60℃；在pH6.0～9.0、60℃以下稳定；对肌酐和肌酸的Km值分别为21.14mmol／L，40.8mmol／L；Ag⁺、Hg²⁺和邻菲罗啉能使酶完全丧失活性，Cu²⁺、Li⁺对酶活性有明显的抑制作用，Co²⁺、Mn²⁺对酶活性有明显促进作用，表面活性剂Tween20和Tween80对酶 活性没有影响。