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白头翁皂苷糖基水解酶能够特异性的水解白头翁皂苷上的糖苷键,使多糖基白头翁皂苷转化为低糖基白头翁皂苷,不仅能提高白头翁皂苷的生物利用率,还可以提高其药效价值。本论文主要对Absidia sp.P00r菌发酵产的白头翁皂苷糖基水解II型酶的分离纯化和基因调取进行了研究。在Absidia sp.P00r菌的液体发酵培养研究中发现,白头翁皂苷糖基水解II型酶在以70%的槐花浸出液为诱导物配制的5°麦芽汁培养基培养120 h时,产量较大,诱导效果较好。利用DEAE-Cellulose(DE52)阴离子交换柱进行分离纯化,得到电泳纯的白头翁皂苷糖基水解II型酶蛋白,将该酶通过蛋白质电印迹转膜至PVDF膜上后,经过蛋白质N-端序列测定,确定该酶N-端序列为YPDSVQHAETVQNLI。根据测得的白头翁皂苷糖基水解II型酶蛋白N-端序列和测得的肽质谱数据登陆NCBI网站和Matrixscience网站的蛋白质数据库进行比对,查找同源性,并根据同源性设计引物。根据白头翁皂苷糖基水解II型酶的N-端序列设计简并引物,以Absidia sp.P00r菌株的mRNA为模板,采用RT-PCR进行基因序列的调取;根据3’RACE和5’RACE技术扩增白头翁皂苷糖基水解II型酶的3’端和5’端的基因片段并测序,得到白头翁皂苷糖基水解II型酶的基因全序列,最后对调取的基因序列进行序列分析。白头翁皂苷糖基水解II型酶的基因全长为1376 bp,其中1~84 bp为5’UTR,长度为84 bp;85~1137 bp为基因的CDS区,长度为1053 bp;可编码351个氨基酸;1138~1365bp为3’UTR,长度为228 bp;1366~1376 bp为Poly A部分,长度为11 bp。