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大珠母贝是生产大型海水珍珠的重要母贝，对海水温度的要求严格，生活的适温范围是25～30℃，不耐低温，了解大珠母贝对环境低温的反应机制有重要意义。本研究首次克隆到大珠母贝冷应激相关基因CCT-α、CCT-β和CCT-η基因cDNA序列全长，并对其在不同组织和急性冷应激下的表达模式进行了分析，以了解大珠母贝的低温反应机制，也为大珠母贝的耐寒性状选育工作提供参考。结果如下: 1.大珠母贝CCT-α、CCT-β和CCT-η基因cDNA全长克隆和生物信息学分析 利用RACE技术首次从大珠母贝中克隆获得CCT-α、CCT-β和CCT-η基因cDNA全长。CCT-α基因cDNA全长1803bp，开放阅读框为1608bp，编码535个氨基酸，在赤道结构域比其他物种少20个氨基酸，具有3个CCT家族蛋白签名序列:36KSSLGPVGLDKML48、57ITNDGATILKLLEVEHP73、85QDQEVGDGT94,包含三个保守的功能结构域:赤道结构域、顶端结构域和中间结构域，含有9个保守的ATP结合位点分别位于39-41、91、95、137、377、395、434、486和488位氨基酸残基处，6个蛋白质结合位点分别位于第1-3、256、457-461、463、525、527-535氨基酸残基处;大珠母贝CCT-α与海蜗牛（Aplysia californica）、斑马鱼(Danio rerio)、人类(Homo sapiens)CCT-α推导的氨基酸序列同源性分别为80.7％、77.1％、75.4％。 获得CCT-β基因两个转录本，分别长1829bp和2289bp，含有相同的5末端非编码区105bp，3末端非编码区分别长591bp和131bp，两个转录本开放阅读框均为1593bp，编码530个氨基酸，具有3个CCT家族蛋白签名序列:38KSTLGPKGMDKIL50、58VTNDGATILKSIGIVNP74、86QDDEVGDGT95，包含三个保守的功能结构域:赤道结构域、顶端结构域和中间结构域，含有9个保守的ATP结合位点分别位于42-44、92、96、160、387、405、445、488和490位氨基酸残基处，含有一个DEAD box基序:377ILDEADRSL385，3个蛋白质结合位点分别位于第1-4、467、526-530氨基酸残基处;大珠母贝CCT-β与牡蛎（Crassostrea gigas）、斑马鱼（Danio rerio）、人类(Homo sapiens) CCT-β推导氨基酸序列同源性分别是90.4％、76.8％、75.8％。 CCT-η基因cDNA全长1895bp，开放阅读框为1895bp，编码543个氨基酸，CCT-η具有3个CCT家族蛋白签名序列:37RTTLGPRGMDKLI49、58ISNDGATILKTLDIVHP74、86QDAEVGDGT94，包含三个保守的功能结构域:赤道结构域、顶端结构域和中间结构域，含有9个保守的ATP结合位点分别位于40-42、92、96、161、391、409、449、492和494位氨基酸残基处，3个蛋白质结合位点分别位于第1-4、250、543氨基酸残基处;大珠母贝CCT-η与牡蛎（Crassostreagigas）、海蜗牛（Aplysia californica）、斑马鱼(Danio rerio)、人类(Homo sapiens)CCT-η推导的氨基酸序列同源性分别是83.2％、81.2％、80.1％、79.3％。 2.大珠母贝CCT-α、CCT-β和CCT-η基因组织差异表达分析 采用实时荧光定量PCR技术检测了CCT-α、CCT-β和CCT-η基因mRNA在大珠母贝心脏、闭壳肌、外套膜、鳃、肝胰腺、胃、唇瓣、腹足8个组织中的表达情况。研究结果显示，CCT-α、CCT-β和CCT-η在大珠母贝各组织中均有表达。CCT-α基因在鳃、外套膜和闭壳肌表达量较高，胃、腹足和唇瓣中表达量较低，肝胰腺和心脏中表达量最低。CCT-β基因在鳃和闭壳肌中表达量亮较高，腹足和唇瓣次之，外套膜、心脏、肝胰腺、胃表达量较低。CCT-η基因在闭壳肌中表达量最高，鳃中表达量其次，腹足、外套膜、胃和唇瓣中表达量较低，肝胰腺和心脏中表达量最低。 CCT-α、CCT-β和CCT-η在大珠母贝闭壳肌和鳃中均有较高表达，提示三者在闭壳肌和鳃中具有重要的的生理作用;而CCT-α在外套膜中有较高表达，提示CCT-α在外套膜中具有特别重要的作用。 3.冷应激对大珠母贝CCT-α、CCT-β和CCT-η基因表达的影响 采用实时荧光定量PCR技术检测了20℃冷应激条件下24h内CCT-α、CCT-β和CCT-η基因mRNA在大珠母贝组织中的表达情况。结果显示，在低温应激条件下，三种CCT基因表达量均呈现先增高后降低的趋势。CCT-α在闭壳肌、肝胰腺、心脏6h时表达量显著上调，12h时仍保持较高的水平，24h时表达量显著下降至0h时表达水平;而在鳃和外套膜12h时表达量才显著升高，24h时表达量显著下降至0h时表达水平。CCT-β在心脏、肝胰腺中在6h时表达量升至最高，12h时仍保持较高的水平，24h时回落至0h时水平，而在闭壳肌、鳃、外套膜12h时表达量显著升高，24h时表达量显著下降至0h时表达水平。CCT-η在闭壳肌中CCT-η基因在冷应激后12h时表达量升至最高，24h时回落至0h时表达水平以下;而在肝胰腺和心脏中CCT-η基因在6h时表达量达到峰值，12h时表达量显著下降，回落至0h时表达水平，24h时表达量维持在此水平。 冷应激后，大珠母贝各组织中CCT-α、CCT-β和CCT-η表达显著上调，但不同组织的冷应激响应模式不同，心脏和肝胰腺响应速度快于其他组织，提示冷应激时CCT-α、CCT-β和CCT-η对保护大珠母贝组织，特别是肝胰腺和心脏等组织具有重要的作用。