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目的:采用对氯苯丙氨酸(PCPA)制造大鼠失眠模型,通过施灸蒙医赫依三穴(顶会穴、赫依穴和黑白际穴)观察失眠模型大鼠的行为学变化和对脑干组织细胞(IL-1β、IL-6、TNF-α、5-HT、NE、DA)的影响,从而探索蒙医灸疗法治疗失眠症疗效机理,进一步阐明灸疗法的起效途经,为临床治疗失眠症提供理论依据。 方法:将60只正常雄性SD大鼠按体重分层随机分为6组,分别为正常组、模型组、安定组、顶会穴组、赫依穴组和黑白际穴组,每组各10只。除正常组外其余5组腹腔注射PCPA混悬液(1ml/100g),连续注射2天制造大鼠失眠模型。成功造模后进行干预:正常组常规喂养;模型组每天抓取固定一次,常规喂养;安定组灌胃安定(地西泮)注射液(0.92mg/kg),每日1次,连续灌胃7天;顶会穴组、赫依穴组和黑白际穴组分别施灸相应的穴位,每日施灸1次,每次5min,连续7天。通过转棒平衡实验和定位航行实验观察对比各组大鼠棒上停留时间和找到平台的时间,并检测大鼠脑干组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、5-HT、NE、DA的含量。结果用SPSS统计软件进行分析。 结果: 1.行为学实验结果: 1.1转棒平衡实验:与正常组比较,模型组大鼠在转棒上维持时间缩短,有显著性差异(P<0.05)。与模型组比较,赫依三穴组(赫依穴组、顶会穴组、黑白际穴组)大鼠在转棒上维持的时间大于模型组,推测蒙医灸疗赫依三穴可以改善失眠模型大鼠的疲劳程度。 1.2定位航行实验:与正常组相比,模型组大鼠找到站台的时间延长,有显著性差异(P<0.05)。与模型组比较,赫依三穴组大鼠找到站台的时间缩短,有显著性差异(P<0.05)。推测蒙医灸疗赫依三穴对失眠模型大鼠的记忆能力有改善作用。 2.细胞因子检测结果: 2.1 IL-1β:模型组与正常组比较,脑干内IL-1β含量升高,有显著性差异(P<0.05)。与赫依三穴组比较,模型组大鼠脑干IL-1β含量虽略大于赫依三穴组,但无显著性差异(P>0.05)。推测蒙医灸疗赫依三穴对失眠模型大鼠脑干IL-1β的含量无明显影响。 2.2 IL-6:与正常组相比,模型组脑干IL-6含量升高,有显著性差异(P<0.05)。与模型组比较,安定组和赫依三穴组脑干IL-6含量降低,有显著性差异(P<0.05)。推测蒙医灸疗赫依三穴能降低失眠模型大鼠脑干组织中IL-6的含量,从而发挥促眠作用。 2.3 TNF-a:与正常组相比,模型组脑干TNF-a含量升高,有显著性差异(P<0.05)。与模型组比较安定组和赫依三穴组脑干TNF-a含量降低,有显著性差异(P<0.05),其中顶会穴组降低更为明显。推测蒙医灸疗赫依三穴能降低失眠模型大鼠脑干TNF-a的含量,改善机体免疫功能,促进睡眠。 3.神经递质检测结果: 3.15-HT:与正常组相比,模型组脑干5-HT含量降低,有显著性差异(P<0.05)。与模型组比较,安定组、赫依穴组和顶会穴组脑干内5-HT的含量升高,有显著性差异(P<0.05),与模型组相比,黑白际穴组脑干5-HT含量无显著性差异(P>0.05)。推测蒙医灸疗赫依穴和顶会穴可通过提高脑干组织5-HT的含量,从而达到促进睡眠作用。 3.2 DA:与正常组相比,模型组脑干DA含量升高(P<0.05)。与模型组比较安定组和赫依三穴组脑干DA含量降低,有显著性差异(P<0.05)。推测蒙医灸疗赫依三穴可降低脑干组织中DA含量,从而促进睡眠。 3.3 NE:与正常组相比,模型组脑干NE含量升高,有显著性差异(P<0.05)。与模型组比较安定组、赫依穴组和顶会穴组脑干NE含量降低,有显著性差异(P<0.05),与模型组相比,黑白际穴组脑干NE含量无显著性差异(P>0.05)。推测蒙医灸疗赫依穴和顶会穴可通过降低脑干组织NE的含量,从而达到促进睡眠作用。 结论: 蒙医灸疗有镇静催眠作用。 1.行为学方面: ⑴施灸赫依三穴可改善PCPA致失眠模型大鼠的疲劳程度。 ⑵施灸赫依三穴可改善PCPA致失眠模型大鼠的记忆能力。 2.脑干组织中细胞因子方面: 施灸赫依三穴可降低PCPA致失眠模型大鼠脑干组织中IL-6、TNF-a的含量而改善睡眠。对IL-1β无影响。 3.脑干组织中神经递质方面: 施灸赫依三穴可提高PCPA致失眠模型大鼠脑干组织中5-HT含量,降低DA、NE的含量,起到催眠作用,其中黑白际穴组对脑干中5-HT和NE无影响,可能是通过其他途径起到调节睡眠作用。