研究背景:类风湿关节炎是一种致畸性自身免疫病,早期确诊及时治疗,可以提高治愈率,至少能改善患者预后。患者体内多克隆B细胞被激活产生大量自身抗体,其中抗角蛋白抗体(anti-keratin antibody,AKA)对RA早期、特异的诊断价值已被公认。但目前AKA检测所用的抗原制备比较困难,基本来源于Wister大鼠食管上皮细胞以及人的手足部胼胝,而不同种属、不同个体之间角蛋白表达的强弱及种类有所差异,使检验方法不易标准化。本实验的目的就是利用噬菌体随机肽库,以AKA为配基筛选特异结合的抗原表位,并评价诊断价值。一方面为人工合成具有诊断价值的肽段,用于常规、标准化的RA早期特异性诊断做前期应用基础研究工作;另一方面初步探讨RA的致病抗原性质,为解释RA的发病机制及实施免疫治疗奠定基础。方法:将间接荧光法检测AKA阳性的20例RA患者混合血清,经33.3%饱和硫酸铵盐析纯化IgG,,以此多克隆抗体为配基,对噬菌体递呈的随机12肽库(预先经正常人血清吸收)进行4轮淘筛,通过ELISA检测AKA结合阳性噬菌体克隆,并用碘化物法提取ssDNA 测序,运用BLAST软件进行序列比对,以寻找相应的天然抗原信息。最后把展示不同氨基酸序列的噬菌体克隆调整至一定浓度包被酶标反应板,通过间接ELISA法检测临床RA、SLE及正常人血清标本,进行诊断效<WP=5>果评价。结果:经过4轮淘洗,筛选到9个与AKA结合的阳性噬菌体克隆,表达二种氨基酸序列,分别命名为模拟表位1、模拟表位2。经过测定临床标本,确定模拟表位1为RA相关多肽,对RA诊断的特异性为94.4%,敏感性为55%,约登诊断指数为149.4%,阳性预测值为91.7%。其氨基酸序列为QSESAGPTTSRR,此序列与人的聚角蛋白微丝蛋白137—148位氨基酸相似。结论:1.用RA患者血清中AKA多克隆抗体筛选噬菌体展示的随机肽库,寻找RA相关抗原表位的方法是可行的。2.本实验用RA患者血清中AKA多克隆抗体筛选噬菌体随机肽库,得到RA相关的多肽-QSESAGPTTSRR,对RA具有特异性、确定诊断价值。