背景与目的免疫球蛋白G4（Immunoglobulin G4,IgG4）是人类免疫球蛋白（Immunoglobulin G,IgG）中比较特殊的一个亚型,IgG4与IgG类型抗体可以进行Fab臂交换（Fab arm exchange,FAE）,形成双抗原表位结合抗体,它还能与其它固定的IgG通过Fc-Fc反应结合,从而减弱抗体依赖性细胞毒作用。IgG4是一种抑制性抗体,能封闭其他类型IgG。在肿瘤等疾病微环境中IgG4浓度增高会与其它亚型IgG竞争性结合Fc受体,由于IgG4的Fc段缺乏与Fcγ受体和补体蛋白C1q的结合能力,从而减弱免疫效应功能,促进了肿瘤的免疫逃逸。IgG4在还原性条件下能产生半分子,谷胱甘肽（glutathione,GSH）能在低浓度下水解蛋白质的二硫键,促进IgG4铰链区链间二硫键转化为链内二硫键,从而促进IgG4 150k D（二聚体）解离为75k D（半分子）。同时GSH可以促进IgG4的FAE,在循环过程中,其中一条L+H链与另外IgG4来源的L+H链重新组合,形成含两条不同L+H链的杂合IgG4,即两个IgG4的一半交换形成新的IgG4分子,这一过程称为IgG4的半分子交换。由于胎儿的免疫逃逸与肿瘤的免疫逃逸均属于抗原的慢性刺激,具有一定的相似性,因此本研究提出假说,妊娠期女性血清中免疫抑制抗体IgG4增多从而加强保护胎儿不受母亲的免疫攻击,胎盘-蜕膜微环境中GSH升高,为IgG4半分子的形成创造了有利条件。我们在早期妊娠胎盘绒毛中发现IgG1抗体附着在其外围,基于IgG4具有通过Fc-Fc结合的功能,本研究将从血清样本和胎盘组织中研究IgG4全分子和IgG4半分子可能在胎盘免疫逃逸中起的作用。材料与方法从IVIG（Intravenous immune globulin,静脉注射丙种球蛋白）中分离实验所需IgG1,IgG4选择了商品化蛋白。首先在银染实验中观察不同浓度GSH还原IgG4形成半分子的含量。随后将半分子从IgG4和GSH的混合液中通过超滤离心分离出来。为探究IgG4半分子的生化功能是否与IgG4具有相似性,我们在Western Blot和ELISA上观察IgG4半分子与IgG1的结合趋势。通过在血清中检测IgG4浓度,和通过Western Blot结果中其与半分子的灰度值比例估算出半分子浓度,利用统计学软件对正常组与妊娠组间IgG4及IgG4半分子进行双因素方差分析。最后在石蜡切片上验证IgG4和IgG4半分子具有封闭IgG1的作用。结果与讨论银染结果显示,IgG4与GSH共孵育时,当GSH浓度不超过10 m M时,产生半分子的含量随GSH浓度增加而增加,且IgG4与不同浓度GSH孵育后再与IgG1反应,反应强度也与GSH浓度呈正相关。将分离出的IgG4半分子与IgG1结合,在0～0.8μg/300μL PBS浓度范围内,结合强度随半分子浓度增加而增加,对比IgG4与IgG1结合强度,发现IgG4半分子可能更容易与IgG1发生结合。测定血清中IgG4浓度,根据灰度值估算半分子浓度,据双因素方差分析发现非妊娠和妊娠血清中IgG4与IgG4半分子浓度数值差异具有统计学意义（P<0.05）。最后在石蜡切片中证实了IgG4及IgG4半分子能与胎盘绒毛外周附着的IgG1发生反应,可能起到封闭作用。结论1.蜕膜里升高的GSH可能使IgG4变成半分子。2.IgG4及IgG4半分子可能通过与附着在胎盘绒毛上的IgG1发生Fc-Fc反应,阻断母亲对胎儿的免疫反应,增强局部的免疫逃逸作用。