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研究目的：研究肝癌细胞株miRNA-214启动子区的甲基化状态。在不同浓度下,甲基转移酶抑制剂对其启动子区甲基化及miRNA-214的影响,进一步分析该RNA甲基化抑制对肝癌细胞系增殖的影响。研究方法：运用生物信息学在线软件预测miRNA-214启动子区域及CpG位点；提取L0-2、Huh7、HepG2和QSG-7701四种肝细胞株DNA,通过亚硫酸氢盐测序法(bisulfite-sequencing PCR,BSP)分析该mi-RNA CpG位点的甲基化;使用0umol/L,5umol/L和10umol/L三种不同浓度的甲基转移酶抑制剂(5-Aza-CdR)干扰肝细胞株启动子区甲基化,并通过RT-PCR方法检测不同浓度处理组的miRNA-214表达；通过细胞增殖实验检测以上三种浓度下抑制剂对肝细胞增殖的影响。研究结果：(1)根据BSP计算,miRNA-214启动子区甲基化频率,未处理组结果显示, L0-2、Huh7、HepG2和QSG-7701四种肝细胞的启动子区甲基化程度分别为51.42%、80.00%、60.00%和68.57%。与正常肝细胞(L0-2)比较,肝癌细胞(Huh7、HepG2和QSG-7701)的miRNA-214启动子区甲基化程度均明显升高,差异有明显差异(F=25.9,p(0.001)。(2)经PCR检测,未处理组4种肝细胞(L0-2、Huh7、HepG2和QSG-7701)的miRNA-214表达量分别为2.84±0.52、1.00±0.08、1.00±0.06和1.00±0.12。与正常肝细胞比较,三种肝癌细胞的miRNA-214表达水平较低,结果具有统计学意义(F=35.39,p<0.001).在5umol/L和10umol/L两种浓度下,处理组四种肝细胞miRNA-214表达水平分别为1.66±0.06、0.58±0.12、0.73±0.13和0.83_±0.04；1.00±0.29、0.34±0.07、0.10±0.01和0.30±0.06。随着干扰素浓度升高,四种肝细胞的miRNA-214表达水平降低。三个递增浓度处理组比较,miRNA-214表达具有统计学意义(F=21.9,p<0.001；F=40.5,p＜0.001;F=98.1,p＜0.001;F=61.6,p<0.001)。(3)细胞增殖实验中,未处理组4种肝细胞系(L0-2、Huh7、HepG2和QSG-7701)增殖水平分别为0.18±0.03、0.81±0.61、0.68±0.28和3.79±0.16;在5μmol/L和10μmol/L浓度下,处理组肝细胞(L0-2、Huh7、 HepG2和QSG-7701)增殖水平为0.17±0.07、1.14±0.76、0.42±0.18和2.70±0.107；0.16±0.04、1.55±0.87、0.37±0.19和0.45±0.37。与正常肝细胞比较,Huh7细胞经去甲基化处理后细胞增殖活性增加(F=72.89,p<0.05),HepG2细胞和QSG-7701经去甲基化处理后细胞增殖活性略降低(F=95.36,p<0.05;F=381.46,p<0.05),差异具有统计学意义。研究结论：通过BSP计算,我们发现3种肝癌细胞均呈现miRNA-214启动子区高甲基化。经不同浓度甲基化转移酶抑制剂干扰处理,肝癌细胞miRNA-214启动子区甲基化显著下降,miRNA-214表达水平降低,但是促进了肝癌细胞增殖。我们的结果证实,DNA甲基化可调控肝癌细胞中miRNA-214的表达,进一步影响肝癌的进展。