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目的胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一。与其他恶性肿瘤一样,胃癌的发生是多基因、多阶段变异累积形成的病理过程,这些基因主要是癌基因、抑癌基因及DNA错配修复基因等。然而,其病因迄今尚未明确,治疗效果仍不理想。其中,抑癌基因功能的丢失可以通过多种途径,除基因突变和杂合性丢失外,还与其启动子发生甲基化修饰有关。有研究报道,染色体1p35-36在肿瘤中发现高频率LOH(loss of heterozygosity,LOH),提示该染色体区域存在未被克隆的肿瘤相关基因。我们前期实验已克隆出一个该基因片段,进行生物信息学分析该片段与COX3基因高度同源。本研究采用RT-PCR技术,检测人胃癌组织、癌旁胃黏膜及远端正常胃黏膜中COX3基因mRNA的表达水平,并采用MSP技术,检测人胃癌组织和其配对正常胃黏膜中COX3基因启动子甲基化状态,观察分析COX3基因mRNA表达下调与其启动子甲基化的关系,探讨胃癌组织中COX3基因mRNA表达异常和启动子甲基化与胃癌病理临床的关系。方法收集胃癌组织及相应癌旁胃黏膜、正常胃黏膜各46例和胃周淋巴结数枚。(1)RT-PCR法检测COX3基因mRNA表达采用E.Z.N.A Total RNA Kit组织基因组RNA提取试剂盒提取标本总RNA,将总RNA逆转录成cDNA,然后以COX3基因引物进行PCR扩增,以GAPDH PCR产物为内参照。(2)MSP检测COX3基因甲基化状态采用E.Z.N.A Tissue DNA Kit组织基因组DNA提取试剂盒提取组织DNA。先用EpiTect Bisulfite Kit甲基化修饰试剂盒修饰基因组DNA后,再纯化DNA,并使用COX3基因甲基化及非甲基化引物进行PCR特异性扩增。结果(1)COX3基因mRNA在46例癌旁胃黏膜和正常胃黏膜中全部表达,两者间表达差异无统计学意义(P>0.05);在46例胃癌癌组织中相对表达量较相应正常及癌旁胃黏膜低(P<0.05),且表达下调23.91%(11/46),与淋巴结转移与否无明显相关(r=0.088,P>0.05)。(2)胃癌组织中COX3基因表达水平与患者性别、年龄、肿瘤最大径、Borrman大体分型、组织类型、肿瘤浸润深度、TNM分期及是否伴有淋巴结转移无关(P>0.05)。(3)46例受检的配对正常胃黏膜组织,其中16例发现COX3基因启动子甲基化,甲基化率为34.8%;在46例胃癌组织中,24例发现COX3基因启动子甲基化,甲基化率为52.2%,两者间无统计学差异(P>0.05)。(4)胃癌组织中COX3基因启动子甲基化与患者性别、年龄、肿瘤最大径、部位、Borrman大体分型、组织类型、肿瘤浸润深度、TNM分期及是否伴有淋巴结转移无关(P>0.05)。(5)胃癌组织中COX3基因mRNA的表达与其启动子甲基化状态无关(r=-0.129,P>0.05)。结论(1)COX3基因mRNA的表达下调可能与胃癌的发生有关。(2)COX3基因启动子甲基化状态可能与胃癌的进展无关。(3)胃癌组织中COX3基因启动子甲基化与其mRNA表达下调无关。