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第一部分LRIG3蛋白在胶质瘤组织中的表达及与患者预后的相关性目的:探讨LRIG3蛋白在不同级别胶质瘤组织中的表达情况及LRIG3表达水平与患者预后总生存时间的相关性。方法:收集2014年9月-2015年9月于武汉同济医院神经外科行开颅手术并诊断为胶质瘤的患者的石蜡包埋组织样本65例（Ⅱ级20例,Ⅲ级17例,Ⅳ级28例）,切片并行LRIG3免疫组化染色。根据染色强度得分（无=0,弱=1;适中=2;强=3）和染色阳性细胞百分比得分（0–10%=1,11–30%=2,31–50%=3,51–100%=4）相乘进行量化评分,单因素方差分析（one-way ANOVA）分析不同级别胶质瘤间LRIG3表达水平的差异。根据LRIG3染色评分将其分为高表达组（4-12分）和低表达组（0-3分）。使用Kaplan-Meier生存曲线分析高级别胶质瘤患者肿瘤组织中LRIG3表达水平与患者的总生存时间的相关性,行Log-rank检验。结果:Ⅱ级胶质瘤中LRIG3的表达水平明显高于Ⅲ级和Ⅳ级胶质瘤中的表达水平,差异具有统计学意义（Ⅱ级vsⅢ级:p=0.026;Ⅱ级vsⅣ级:p=0.00012）。在胶质母细胞瘤（WHOⅣ级）及高级别胶质瘤中（Ⅲ级+Ⅳ级）,LRIG3高表达组总生存情况明显优于LRIG3低表达组（p=0.046和p=0.023）。结论:LRIG3在高级别胶质瘤组织中表达水平相对于低级别胶质瘤中下调,在高级别胶质瘤中,LRIG3表达量与患者预后正相关。第二部分可溶性LRIG3的鉴定及稳定过表达LRIG3和可溶性LRIG3蛋白胶质瘤细胞系的建立目的:探讨可溶性LRIG3的存在,及为进一步探讨LRIG3和可溶性LRIG3蛋白的功能建立稳定转染过表达LRIG3全长（LRIG3-full,LRIG3）和可溶性LRIG3胞外段（LRIG3-ecto,soluble LRIG3,sLRIG3）蛋白的胶质瘤细胞系。方法:在可诱导表达LRIG3蛋白的胶质瘤细胞培养上清及患者的血清和胶质瘤的囊液标本中通过Western blot检测可溶性LRIG3蛋白的存在。进一步构建含FLAG标签的LRIG3全长序列和胞外段序列的表达质粒,慢病毒包被并稳定转染GL15、U87和PriGBM胶质瘤细胞,Western blot和原位免疫荧光检测目的蛋白的表达情况。结果:在胶质瘤细胞系的培养上清及胶质瘤患者的血清和囊变胶质瘤的囊液标本中检测到大小约110 k D（小于全长蛋白的分子量）的可溶性LRIG3蛋白的存在。因为检测sLRIG3的抗体识别的是LRIG3的胞外段区域,且sLRIG3的分子量与预测的LRIG3胞外段分子量一致,所以sLRIG3即为可溶性LRIG3胞外段蛋白。成功构建含FLAG标签的LRIG3全长序列和胞外段序列的表达质粒并稳定转染GL15、U87和原代Pri GBM胶质瘤细胞,Western blot和原位免疫荧光染色等证实目的蛋白稳定表达。结论:可溶性LRIG3蛋白存在于胶质瘤细胞的细胞系培养上清、患者的血清及囊变胶质瘤的囊液中,建立了稳定过表达全长LRIG3蛋白（LRIG3-full）和可溶性LRIG3胞外段蛋白（LRIG3-ecto,soluble LRIG3,sLRIG3）的胶质瘤细胞系。第三部分LRIG3和可溶性LRIG3蛋白对胶质瘤生物学特性的影响目的:探讨过表达LRIG3全长（LRIG3-full,LRIG3）及胞外段蛋白（LRIG3-ecto,sLRIG3）对胶质瘤细胞系增殖、侵袭、迁移和成瘤特性的影响。方法:在建立的过表达LRIG3全长（LRIG3-full,LRIG3）及胞外段蛋白（LRIG3-ecto,sLRIG3）的GL15、U87和Pri GBM细胞系中,通过CCK-8检测增殖差异,流式细胞术检测细胞周期进展的差异,划痕实验及Transwell小室侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力差异,软琼脂克隆形成实验模拟检测细胞体外成瘤差异,裸鼠皮下成瘤实验检测细胞体内成瘤差异。Western blot检测相关信号通路蛋白表达差异,探讨LRIG3和sLRIG3对胶质瘤生物学特性影响的机制,并在临床胶质瘤组织样本中进行Western bolt检测,进一步明确相关信号通路蛋白表达差异与LRIG3水平的相关性。在体实验的肿瘤组织行包埋切片免疫组化染色,分析p MET、p Akt及Ki67的表达差异。结果:在GL15、U87和Pri GBM细胞系中,过表达LRIG3和sLRIG3的实验组相对于对照组,明显抑制了细胞的增殖、周期进展、软琼脂克隆形成能力、迁移和侵袭特性,差异具有统计学意义。Western blot证实过表达LRIG3和sLRIG3抑制MET/PI3K/Akt通路的活化。临床胶质瘤组织蛋白检测证实MET和Akt的磷酸化水平与LRIG3表达水平负相关。在体实验观察到过表达LRIG3和sLRIG3时,细胞的成瘤体积和成瘤速度相对于对照组明显下降,且免疫组化提示MET和Akt的磷酸化水平及肿瘤细胞的增殖指数Ki67均下降。结论:sLRIG3与LRIG3蛋白具有相似的生物学功能,通过抑MET/PI3K/Akt通路抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭,并抑制体内成瘤特性。第四部分血清sLRIG3的表达水平与高级别胶质瘤患者预后的相关性目的:探讨血清中sLRIG3的水平与胶质瘤级别的相关性,以及高级别胶质瘤患者血清中sLRIG3的水平与患者预后总生存时间的相关性。方法:收集2014年12月-2015年12月于武汉同济医院神经外科行开颅手术并诊断为胶质瘤的患者的术前血清50例（Ⅰ级6例,Ⅱ级11例,Ⅲ级6例,Ⅳ级27例）及正常非肿瘤患者对照血清14例,用ELISA检测其中sLRIG3的含量,进行差异分析。高级别胶质瘤中,根据sLRIG3的水平,将其分为sLRIG3高表达和低表达组,进行Kaplan-Meier生存分析,判断sLRIG3水平与高级别胶质瘤患者预后的相关性（因低级别胶质瘤样本数较少及生存时间多大于30个月,未进行相关生存分析）。结果:ELISA检测血清样本的sLRIG3水平波动在0-21 ng/ml之间,在正常对照及Ⅰ-Ⅳ级胶质瘤患者血清中,sLRIG3平均水平逐渐增高,除外Ⅳ级与正常对照间差异有统计学意义外（p=0.012）,其余各组间差异无统计学意义。进一步分析显示,sLRIG3水平与性别无相关性。sLRIG3在高级别胶质瘤患者血清中的表达水平较低级别胶质瘤患者血清及正常对照血清中均高,差异有统计学意义（HGG vs Control,p=0.010;HGG vs LGG,p=0.048）。在高级别胶质瘤患者中,根据sLRIG3表达水平的均值3.9ng/ml,将33例患者分为高表达组（13例）和低表达组（20例）,生存分析显示血清sLRIG3水平高表达组较低表达组预后总生存时间延长。结论:胶质瘤患者血清中sLRIG3含量在不同级别（I-Ⅳ级）间的差异无统计学意义,但高级别胶质瘤患者组血清中sLRIG3的表达水平明显高于低级别胶质瘤患者组。在高级别胶质瘤患者中,血清sLRIG3含量与总生存时间正相关,sLRIG3可作为高级别胶质瘤患者判断预后的血清学标志物。