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副鸡禽杆菌(Avibacterium paragallinarum, Apg)是鸡传染性鼻炎的致病菌,主要引起鸡的生长发育受阻,产蛋量下降,给养鸡业带了相当大的经济损失。病原菌体内诱导基因的研究是探索该病防治措施的重要基础。副鸡禽杆菌侵入宿主后,为了适应体内的环境,会启动一系列基因的表达,这些体内诱导基因有可能是引起疾病的关键基因,有可能作为候选的免疫及药物分子新靶位。本研究首先提取Apg基因组DNA,用Sau3A I酶切后回收片段插入到pET系统表达载体中,构建副鸡禽杆菌的全基因组表达文库。应用体内诱导抗原技术(In vivo induced antigen technology, IVIAT)的原理,先用IPTG诱导文库表达蛋白,然后用经体外培养的副鸡禽杆菌菌株和大肠杆菌BL21(DE3)吸附过的鸡副鸡禽杆菌血清对该文库进行初筛和复筛,对筛选得到的阳性克隆提取质粒用T7启动子引物测序,测得的序列在NCBI上比对后确定开放阅读框(ORF)。以筛选获得的H18膜合成域2基因簇为研究对象构建基因缺失载体,然后将H18基因缺失载体电转入副鸡禽杆菌,用卡那霉素和蔗糖进行筛选,用PCR初步鉴定H18L基因缺失的菌株。本实验构建了副鸡禽杆菌基因组表达文库,文库大小为6×103,文库重组质粒含有率大于80%,达到了理论要求。经过筛选、测序和比对本实验最终确定了5个开放阅读框。有一个表达为转运谷氨酰还原酶,一个转录终止因子和荚膜合成域2基因簇,还有两个表达为保守假想蛋白。在此基础上,成功构建了副鸡禽杆菌H18L基因的缺失载体,并将该载体电转入到副鸡禽杆菌0083标准菌株中,目前正在进行鉴定工作。本研究应用体内诱导抗原技术筛选到了5个副鸡禽杆菌在宿主体内诱导表达的基因,并对基因的功能进行了初步探讨,在研究副鸡禽杆菌在宿主体内生存和致病关键基因奠定了基础,也为鸡传染性鼻炎防治研究提供了思路。