研究背景:寨卡病毒(Zikavims,ZIKV)是一种蚊媒传播病毒,可引起新生儿小头畸形,及成人神经性病变(格林巴利合征)。目前尚无疫苗及特异的治疗方法。I型干扰素(interferon,IFN)是宿主固有免疫系统的重要分子之一,在对抗寨卡病毒感染过程中发挥重要作用。I型IFN与受体结合之后,通过激活JAK/STAT信号传导通路,朿幡一系列干扰素刺激基因(interferon-stimulatedgenes,丨SGs)的表达,发挥抗病毒和免疫调节作用。丨SG12’和丨SG16均为干扰素刺激基因,且属于同一家族,但在抑制丙肝病毒(Hepatitis C Vims,HCV)复制中的作用相反。这些数据显示,ISG12和1SG16与病毒感染有关,但是它们对寨卡病毒复制的作用还没有相关报道,具体ta制也有待进一步研究。研究目的ISG12a/ISG16对ZIKV复制的影响和作用机制研究方法:1.通过质粒转染或者siRNA沉默分别上调或者抑制A549细胞中ISG12a或1SG16的表达,再用Z1KV感染细胞,采用real-time βCR以及Western Blot等方法检测ISG12a/ISG16表达水平的改变对ZIKV复制的影响;2.通过质粒转染或者siRNA沉默分别上调或者抑制A549细胞中ISG12a或ISG16的表达,在IFNβ刺激下,采用western b丨ot检测Janus酪氣酸激酶/信号传导转录激活因子(JAK/STAT)信号通路中STAT1磷酸化(p-STATl)情况;双荧光报告基因实验检测干扰素刺激反应原件(ISRE)的活性;realtime βCR检测ISGs和产生IFNβ的相关信号通路关键分子的表达,评价ISG12a/ISGI6对I型干扰素产生及干扰素信号通路激活的影响;3.通过质粒转染或者siRNA沉默分别上调或者抑制A549细胞中ISG12a或ISG16的表达,用ZIKV感染细胞后再加入IFNβ处理,real-time βCR检测ZIKV复制情况,评价ISG12a或ISG16对IFNβ抗病毒活性的影响。研究结果:1.寨卡病毒感染或IFN(3刺激均能引起ISG12a/ISG16表达升高。高表达ISG12a或ISG16抑制寨卡病毒复制,而抑制ISG12a或ISG16表达促进寨卡病毒复制。2.高表达ISG12a或ISG16可以通过增加RIG-I、TLR3和MDA5的表达,促进内源性IFNβ的产生,从而增强I型IFN信号通路中STAT1的磷酸化(pSTAT1)水平和ISRE活性,刺激IFIT1、ISG15和MxA等ISG的表达,从而发挥抑制ZIKV复制的作用。3.高表达ISG12a或ISG16增强外源性IFNβ的抗ZIKV活性。研究结论:ISG12a和ISG16通过促进内源性IFNβ的产生和激活I型干扰素信号通路从而抑制ZIKV的复制,并增强外源性IFNβ抗ZIKV的作用。该结果表明ISG12a和ISG16在宿主抗ZIKV感染的固有免疫反应中发挥着重要的作用。