论文部分内容阅读
中草药及其活性成分抗肿瘤的作用研究,成为现代药物开发的热点。经研究发现,一些中草药的多糖成分具有良好的抑制肿瘤生长和提高机体免疫功能的作用。国外最新研究资料表明,仙人掌果实的果浆能抑制宫颈癌、卵巢癌和膀胱癌细胞的增殖,而且能抑制患有卵巢癌大鼠的肿瘤生长。目的:本研究旨在探讨仙人掌果多糖体外及体内的抗肿瘤作用。方法:1.仙人掌果多糖（CPFP）体外抗肿瘤研究:①以CPFP提取物为实验对象,以人肝癌HEPG-2株、人卵巢癌SKOV3株、人肝癌HCC-LM3株、人胃癌SGC7901株、人肝正常LO2株为实验细胞株,应用MTT法检测细胞的增殖活性。②流式细胞术定量检测细胞凋亡率③RT-PCR检测P53mRNA的表达④蛋白质印迹检测P53蛋白表达2.CPFP体内抗肿瘤研究:①建立S180荷瘤小鼠移植性肿瘤模型,随机分组、给药。②连续给药10天后处死S180荷瘤小鼠,取瘤块,检测分析CPFP对各组荷瘤小鼠的肿瘤抑瘤率③摘取S180荷瘤小鼠胸腺和脾脏,计算胸腺指数和脾脏指数;制备脾淋巴细胞悬液,用ConA刺激脾淋巴细胞增殖,MTT法检测脾淋巴细胞转化功能④用比色法检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量。⑤透射电镜观察肿瘤组织超微结构变化的影响。⑥HE染色观察瘤组织病理学改变及免疫组化法观察Bax、P53、VEGF蛋白的表达。结果:1.体外实验结果:①CPFP对人体卵巢癌SKOV-3、胃癌7901、肝癌HEPG-2、肝癌LM3细胞的抑制作用较弱,对人正常肝细胞LO2毒副作用小。5-FU对人正常肝细胞LO2抑制作用明显。②流式细胞术检测LM3细胞凋亡率可知:生理盐水组的凋亡率为9.76%;CPFP（0.625mg/ml）组凋亡率为19.77%;CPFP（2.500mg/ml）组凋亡率为34.12%。③RT-PCR结果可以得出:随CPFP剂量的增加,P53mRNA的表达下调。④Western blot结果可以得出:随CPFP剂量的增加,P53蛋白的表达减弱。2.体内实验结果:①CPFP低、中、高剂量组及环磷酰胺（CTX）组的抑瘤率分别是:7.78%、31.13%、49.70%、61.07%。CPFP高、中剂量组抑瘤率高于30%。②CPFP各剂量组胸腺指数较生理盐水组有所增高,其中高、中剂量组有显著差异（P＜0.05）;各剂量组脾脏指数较生理盐水组无显著性差异（P＞0.05）;CPFP能促进脾淋巴细胞增殖,高剂量组、中剂量组与生理盐水比较有显著性差异（P＜0.01）③CPFP能降低血浆MDA、NO含量,升高SOD含量,高剂量、中剂量组与生理盐水组比较有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）④电镜观察显示:CPFP作用后的肿瘤细胞间隙增大,核内染色质边集,核仁浓缩或碎裂,胞质内线粒体空泡变性,线粒体嵴融合呈早期凋亡迹象。⑤HE染色可见CPFP药物组瘤组织有病理学改变,高剂量组瘤组织坏死较严重。CPFP能升高瘤组织中Bax蛋白表达,高、中剂量组与生理盐水组相比较有显著性差异（P＜0.05）;CPFP能降低瘤组织中P53蛋白表达,高中低剂量组与生理盐水组相比较均有显著性差异（P＜0.05或P＜0.01）;CPFP能降低瘤组织中VEGF蛋白表达,高、中剂量组与生理盐水组比较有显著性差异(（P＜0.05或P＜0.01）。结论:CPFP具有一定的抗肿瘤作用,其机制可能与改善免疫功能、清除自由基、增强机体抗氧化功能和诱导肿瘤细胞凋亡有关。