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对乙酰氨基酚(acetaminophen, APAP)过量使用是世界各地急性肝脏衰竭的主要诱因之一,其与肝脏内大量中性粒细胞的浸润密切相关。然而,有关肝脏内中性粒细胞浸润与炎症的具体机制仍不是很清楚。近年来研究发现微小RNA(microRNA, miRNA)可参与调控细胞增殖、分化、凋亡等多种重要生物学过程。髓系特异表达的miRNA-223被报道可以调节中性粒细胞的生成和功能,其是否参与调控APAP诱导的急性肝损伤及相关中性粒细胞的功能目前还未见文献报道。本研究构建miR-223敲除小鼠,以此深入探讨其对APAP诱导急性肝损伤及中性粒细胞功能的影响及其作用的分子机制。本实验分别对空腹过夜饥饿或正常饮食条件下野生型小鼠和miR-223敲除小鼠进行APAP腹腔注射以建立小鼠急性肝损伤模型。6小时或者24小时后,取小鼠血清进行肝脏转氨酶和miR-223检测,取肝组织进行病理组织学及相关免疫组化检测。采用磁珠分选方法分离肝脏,骨髓及外周血中中性粒细胞进行相关基因实时定量PCR或者western blot检测。结果发现,过量APAP注射能明显升高小鼠肝脏和血清中miR-223水平。更重要的是,相比于野生型小鼠,miR-223敲除小鼠血清中具有更高水平的ALT,AST,及更加严重的肝脏坏死,这提示miR-223敲除小鼠更易于APAP诱导的肝损伤。正如预期的一样,miR-223敲除小鼠肝脏中有更多的中性粒细胞和巨噬细胞的浸润。相对应的,miR-223敲除小鼠肝脏中炎症反应及氧化性损伤标记4-羟基壬烯酸(4-Hydroxynonenal,4-HNE)和N-硝基酪氨酸(N-nitrotyrosine)的表达明显高于野生型小鼠。有趣的是,腹腔注射坏死细胞可以引起小鼠腹腔中性粒细胞的大量浸润,而这种反应在miR-223敲除小鼠中更加明显。更有甚者,在体内或者体外,Toll样受体9(toll-like receptor 9, TLR9)配体或者坏死肝脏细胞释放的自由DNA通过TLR9/NF-κB通路诱导中性粒细胞miR-223的表达,而TLR9阻断剂可以抑制APAP诱导的中性粒细胞miR-223表达。此外,体外用TLR9配体刺激中性粒细胞后,缺乏miR-223的中性粒细胞产生更多的炎症细胞因子和趋化因子。机制上,miR-223被发现可以部分调控IKKa的表达负反馈控制TLR9/NF-κB介导的炎症反应。以上研究表明,miR-223的缺失增加肝脏中性粒细胞炎症反应和氧化应激反应,随后加重APAP诱导的肝毒性。这些发现提示,miR-223是控制急性中性粒细胞浸润和功能的重要调节分子,其可能作为治疗APAP诱导肝损伤的一个治疗靶点。