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第一部分小鼠长链非编码RNA模式及成骨细胞特异性长链非编码RNA筛选目的研究lncRNA在小鼠体内多个组织器官或细胞中的表达模式,寻找新的成骨细胞特异性表达或优先表达的lncRNA。方法首先购买C57BL/66周龄、雄性小鼠,无菌条件下取其心、肝、肺、肾、脑组织,在液氮中浸没并使其迅速降温保存。培养小鼠成骨细胞。随之提取组织、细胞total RNA并予以纯化,合成cDNA并予以PCR扩增,继之合成荧光标记cRNA并行PCR扩增,纯化荧光标记cRNA并测量其浓度。将cRNA片段化并和芯片杂交。获得microarray数据后将数据进行标准化,多组数据比对分析,研究小鼠心、肝、肺、肾、脑中lncRNA的表达及分布,重点研究小鼠成骨细胞特异性表达或优先表达的lncRNA。用Northern blot验证所挑选的lncRNA在不同组织和细胞的表达水平。结果(1)lncRNA在小鼠心、肝、肺、肾、脑及成骨细胞中表现出不同的表达模式。(2)发现有17个lncRNA在成骨细胞表达而在其他组织中不表达或极低表达。(3)发现一种lncRNA,暂命名为lncRNA-OB。该lncRNA在成骨细胞高表达,而在其他组织中几乎不表达或极低表达。lncRNA-OB位于小鼠第4条染色体。lncRNA-OB在小鼠成骨细胞高表达,在心、肝、肺、肾、脑组织表达较低或不表达。结论发现一个新的成骨细胞特异性表达的lncRNA,小鼠体内lncRNA表达分布或与其功能有关。第二部分小鼠成骨细胞特异性长链非编码RNA对其功能的影响目的研究小鼠成骨细胞特异性长链非编码RNA对其功能的作用。方法针对第一部分实验筛选出来的lncRNA——lncRNA-OB,通过siRNA抑制其在ST2细胞中的表达,观察抑制其表达前后ST2细胞诱导成骨分化过程中的碱性磷酸酶表达及骨钙素分泌情况,以及R(?)(?)NX2与Osterix的表达情况。在Genbank查找lncRNA-OB的上游基因、下游基因并分析其功能。结果(1)用siRNA使lncRNA-OB低表达,ST2细胞向成骨细胞分化过程中骨钙素分泌和碱性磷酸酶活性明显减少。(2)用siRNA使lncRNA-OB低表达,ST2细胞向成骨细胞分化过程中RUNX2mRNA和Osterix mRNA的表达明显降低。(3)lncRNA-OB上游基因和下游基因的查找。结论IncRNA-OB对成骨细胞的分化有促进作用。