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相对于化学农药,生物杀虫剂虽然具有杀虫后持续效果好、不污染环境、不伤害天敌、对人类和其它高等动物无害等诸多优点,但也有自身的缺陷,例如杀虫速度相对缓慢、害虫抗性日益严重等。研究表明围食膜是昆虫最重要的抵御杀虫剂的组织。昆虫杆状病毒增效蛋白(ENHANCIN)具有金属蛋白酶活性,可能通过破坏宿主围食膜的完整结构或者介导病毒与昆虫中肠上皮细胞融合,进而加速病毒粒子的入侵,提高病毒和其他病原物的感染性。因此,ENHANCIN在提高杀虫效率方面具有广阔的应用前景。为揭示AsGV ENHANCIN蛋白的介导分子功能机制,本研究利用AcMNPV Bac-to-Bac系统,将实验室前期获得的AsGV enhancin和AsGV enhancing-2679基因通过供体质粒pFastBacHT转座到穿梭质粒AcMNPV Bacmid中,随后转染昆虫细胞Sf9进行真核表达。结果成功构建出真核表达载体Bacmid-AsGV-En/2679并转染成功;为获得足量的TnGV ENHANCIN蛋白以研究其蛋白酶功能机制,本研究将实验室已构建好的重组杆状病毒真核表达质粒Bacmid-TnEn和含有报道基因EGFP的重组杆状病毒真核表达质粒Bacmid-TnEn-GFP,分别转染昆虫细胞Sf9,然后进行大批量的细胞悬浮表达及纯化。结果镜检发现转染3天后细胞出现病变,通过荧光显微镜观察到绿色荧光,收集细胞,电泳检测确定外源基因已成功表达;在以往的病原与昆虫的互作研究方面,学者们往往更多关注于病原研究。然而,近年来人们日益认识到由于昆虫围食膜上的蛋白质关系到病原的作用方式、病原的定向改造方法以及昆虫抗药性机理等受体的研究,也是不可忽视的。因此本研究以棉铃虫(Helicoverpa armigera)为对象,通过液相色谱-质谱联用技术对其围食膜蛋白质进行分析,成功鉴定出97个蛋白质。分析发现这些蛋白质主要参与消化、免疫反应过程及解毒代谢等。这解释了围食膜不仅具有帮助中肠进行酶解食物等消化吸收作用,还参与昆虫的免疫防御过程,对中肠起到保护作用。为明确棉铃虫中肠围食膜蛋白的生理功能、寻找生物防治新靶标以及发展新的高效生物杀虫剂提供了理论依据。