论文部分内容阅读
研究背景和目的转录因子HOXD9作为HOX家族中的一员,参与细胞增殖、细胞凋亡、细胞形态和细胞迁移等多种细胞活动过程,有研究发现HOXD9与多种恶性肿瘤的发生发展有密切关系。然而,转录因子HOXD9对胃癌的影响仍不明确。RUFY3蛋白(RUN和FYVE结构域蛋白3)在多种Ras样GTP酶肿瘤通路中起重要作用,已有文献表明RUFY3作为致癌因子能够促进胃癌及肠癌细胞的迁移能力,另外有文献表明在肠癌细胞中RUFY3与FOXK1存在相互作用。本研究利用生物信息学查找RUFY3转录起始上游启动子区域的核苷酸序列,发现RUFY3的启动子区域存在转录因子HOXD9的结合位点。本研究旨在探讨转录因子HOXD9对胃癌细胞的增殖、侵袭和转移过程的影响并进一步明确转录因子HOXD9是否直接转录调控RUFY3,阐明转录因子HOXD9和RUFY3在胃癌增殖、侵袭和转移过程中发挥的作用,为胃癌的治疗探索新的分子靶点。研究内容和方法利用蛋白质印迹法,检测HOXD9在胃癌组织及对应正常组织的表达情况,以及HOXD9在胃癌细胞株及正常胃粘膜细胞株的表达情况。利用免疫组织化学染色法检测在胃癌组织以及对应正常组织中HOXD9的表达水平,分析HOXD9的表达情况与胃癌患者的临床预后及临床病理特征的关系。然后构建HOXD9稳定表达株,利用软琼脂克隆形成实验、CCK-8实验、EdU实验、Transwell侵袭实验以及细胞划痕实验等实验检测上调HOXD9后对于胃癌细胞增殖及侵袭转移能力的影响。利用双荧光素酶报告基因实验检测转录因子HOXD9与RUFY3的启动子区域的潜在位点结合并启动RUFY3转录,ChIP实验证实HOXD9与RUFY3启动区域位点直接结合。利用免疫组织化学染色法检测HOXD9与RUFY3在胃癌组织中表达水平的相关性。最后通过敲低RUFY3,利用体外细胞实验及动物实验检测下调RUFY3对HOXD9介导的胃癌细胞增殖能力及侵袭转移能力的影响。结果1.HOXD9在胃癌细胞系和胃癌组织中的表达高于正常;2.HOXD9的高表达水平与胃癌患者的不良预后密切相关,且与胃癌的分化程度、TNM分期以及是否发生淋巴结转移等临床病理特征密切相关;3.上调HOXD9的表达能够促进胃癌细胞的增殖、侵袭和转移能力;4.双荧光素酶报告基因实验及ChIP实验均证实RUFY3启动子区域处存在转录因子HOXD9的结合位点,转录因子HOXD9能与RUFY3的启动子结合并激活RUFY3的活性;5.HOXD9与RUFY3均在胃癌组织中呈高表达且表达水平呈正相关;6.体外细胞实验及体内动物实验证明下调RUFY3能抑制HOXD9介导胃癌细胞增殖、侵袭和转移的促进作用。结论转录因子HOXD9在胃癌中发挥癌基因的作用,其在胃癌细胞以及胃癌组织中的表达水平较正常胃粘膜细胞或正常组织有显著升高,过表达HOXD9促进胃癌细胞增殖、侵袭及转移的活性;转录因子HOXD9通过结合在RUFY3的启动子区域转录激活RUFY3的表达,HOXD9与RUFY3在协同促进胃癌细胞的增殖、侵袭和转移活性和体内成瘤及体内转移具有重要作用。