酪蛋白是牛乳中的主要蛋白质,含量相对稳定,因此可以利用原料奶中酪蛋白含量作为评定原料奶质量和判定原料奶是否掺假的一个指标。本研究选取含量较为稳定的α_s-和κ-酪蛋白制备多克隆抗血清,研制检测原料奶中两种酪蛋白含量的酶联免疫检测试剂盒。实验结果如下:1、用α_s-酪蛋白和κ-酪蛋白作为免疫原免疫新西兰白兔,制得的抗体用间接ELISA检测效价,结果表明:第六次加强免疫后,即可获得较高效价的多克隆抗体,其效价分别为1:1600和1:3200。2、间接ELISA分析了抗体的特异性,两种抗体的特异性较好,它们与乳中其它蛋白交叉反应很小。3、用间接ELISA优化了包被抗原及抗血清的最佳工作浓度:α_s-和κ-酪蛋白包被浓度分别为600ng/ml和200ng/ml,α_s-和κ-酪蛋白抗血清工作浓度分别为1:160和1:640。确定了抗原包被的温度和时间:37℃,2h。4、初步建立了原料奶中α_s-和κ-酪蛋白的检测方法。α_s-酪蛋白检测的线性范围是25～1200ng/ml,相关系数为0.9825,回收率在91.97%～115.61%之间;κ-酪蛋白检测的线性范围是25～1400ng/ml,相关系数是0.9831,回收率在95.83%～125.83%之间。用建立的间接ELISA检测样品中的酪蛋白含量,并与用FOSS FT120乳成分分析仪检测结果进行确证,准确度均达到90%以上。本实验所建立的检测牛乳中α_s-和κ-酪蛋白含量的方法,具有特异性强,操作简单,技术条件低等特点,可以用于针对牛乳中掺入其他杂蛋白的鉴别和原料奶酪蛋白质量浓度是否合格的快速检测。