发酵法生产DHA功能性油脂的研究

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二十二碳六烯酸(DHA)是一种对人类具有多种生理功能的天然脂肪酸,有抗癌、减肥、抗动脉硬化等生理活性。目前,二十二碳六烯酸主要来源于鱼类以及藻类的代谢物,由于鱼类提取的DHA有很多不足之处,并且培养藻类的条件较严格,人们将关注点越来越多地转移到真菌的合成。本文从天然样品取样,通过平板培养,划线分离,发酵培养,并利用苏丹黑染色法,筛选出4株产油脂菌株,其中一株粉红色酵母,两株白色酵母,一株霉菌。通过甲醇-氯仿方法提取这四株产油菌株所合成的油脂,经过甲酯化方法,气相色谱分析其主要成分,得到一株含有DHA的菌株。通过查阅《酵母菌的特征与鉴定手册》,针对合成DHA菌株进行细胞形态鉴定和生理生化鉴定。经逐步鉴定,确定该株菌株为乳糖红酵母。利用物理、化学以及复合诱变手段对乳糖红酵母进行诱变实验,选育出高产DHA菌株,最后得到15株正突变株。经遗传稳定性实验,最终得到3株可以稳定合成DHA的菌株。选择诱变实验得到的DHA最高的一株突变株,测定72h生长曲线,并进行发酵优化实验,得到发酵的最适培养基成分为100g/L葡萄糖、10g/L蛋白胨、1g/L硫酸锌、10g/L红花油、初始pH6.0、发酵温度25℃、发酵时间5天、接种量4%。经优化培养和正交试验,该突变株的DHA产量达到0.465g/L。
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