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IFN-γ主要是由活化的CD4十Th1细胞、CD8十T细胞和NK细胞产生,除具有抗病毒、抗肿瘤活性外,免疫调节作用是其主要的生物学功能,如:激活巨噬细胞、上调MHC I, II类分子表达水平、促进抗原提呈,诱导Th细胞的分化等,在机体针对肿瘤及多种胞内病原体感染等疾病的细胞免疫中发挥重要的作用,是体现机体免疫功能的一项重要指标。而抗IFN-γ特异性单克隆抗体(McAb)在评价机体细胞免疫功能方面具有重要的应用价值。本研究成功的构建了重组质粒pcDNA3.1-IFN-γ免疫BABL/c鼠制备抗鹅IFN-γMcAb并对其特性进行鉴定,为进一步研究鹅IFN-γ的生物功能及鹅细胞免疫应答提供物质基础。本研究将pcDNA3.1载体和pMD18-T-mGoIFN-γ质粒分别经Hind III和EcoR I双酶切后,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1的相应位点,构建了鹅IFN-γ基因的真核重组表达质粒pcDNA3.1-IFN-γ。经酶切鉴定,结果表明所构建的重组质粒为鹅IFN-γ基因特异性真核表达质粒。将获得的重组质粒命名为pcDNA3.1-IFN-γ。大量提取pcDNA3.1-IFN-γ质粒免疫BALB/c鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术,获得3株可稳定分泌抗鹅IFN-γMcAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1E8,1H11和2D6。3株McAbs的亚型均为IgM,轻链为κ链。ELISA鉴定结果表明,腹水效价分别为1∶8000,1∶16000和1∶28000,且1H11相对亲和力大于1E8和2D6的相对亲和力。采用相加ELISA法证明,1H11与2D6分泌的McAb识别相同的抗原位点,1E8与1H11和2D6分泌的McAb识别不同的抗原位点。经Western blot检测,3株McAbs均可与原核表达的鹅IFN-γ发生反应,表明本试验所制备的3株McAbs均为针对鹅IFN-γ的特异性McAb。