丝素蛋白支架对大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成和功能改善的影响

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目的:观察丝素蛋白(silk fibroin, SF)支架移植对大鼠全横断脊髓损伤(spinalcord injury,SCI)后胶质瘢痕形成和功能改善的影响,并评价该支架作为组织工程材料修复SCI的可行性。方法:1.多孔SF支架的制备:利用桑蚕丝制备圆柱形多孔SF支架,扫描电子显微镜(scanning electron microscopy,SEM)观察支架表面及断面形态。2.大鼠SCI造模及支架移植:清洁级雌性Sprague-Dawley(SD)大鼠分实验组、对照组;制备全横断SCI模型,制备的SF支架移植至实验组大鼠脊髓断端,对照组仅接受SCI手术。3.检测指标:建模后每周行BBB功能评分直至实验结束;对支架/脊髓组织行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色,然后进行胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)和生长相关蛋白-43(growth-associated protein-43,GAP-43)的免疫组织化学检测(immunohistochemistry analysis),观察并分析材料/脊髓连接处星形胶质细胞(astrocytes,AS)和神经纤维生长情况;对GFAP、GAP-43行免疫印迹分析(western blotting analysis),定量测定蛋白情况。结果:SEM观察见SF支架内部呈多孔的网格状结构,内部孔隙较多,分布均匀。SCI建模后4~6w,SF支架移植组大鼠BBB功能评分高于对照组(P<0.05)。HE切片观察发现支架/脊髓连接处无炎症等不良反应。免疫组织化学检测观察发现:SF移植组支架/脊髓处可见少量神经纤维,而对照组未发现神经纤维;SF移植组GFAP阳性表达较对照组表达不明显,组间比较具有统计学意义(P<0.05);SF移植组GAP-43阳性表达强于对照组,两组比较具有统计学意义(P<0.05)。免疫印迹分析表明:对照组GFAP蛋白表达量高于SF移植组(P<0.05);SF移植组GAP-43蛋白表达量高于对照组(P<0.05)。结论:SF支架移植对大鼠SCI后减少胶质瘢痕形成有一定作用,并可间接利于神经再生。因此,SF作为新型的神经组织工程支架材料对于修复SCI具有一定的应用前景。
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