目的:本文针对“白花香莲解毒汤”的经方进行新药研发,将其制成颗粒剂,对白花香莲解毒颗粒制备工艺、质量标准、稳定性、急性毒性、抗乙肝病毒作用等五个方面进行研究,提高制剂的稳定性、使其携带和服用方便、质量保障、药效稳定,更好服务于临床。方法:以去乙酰车叶草酸甲酯和出膏率为指标,采用单因素、正交试验方法,优选出白花香莲解毒颗粒的最佳提取工艺。以成型率、溶化性、流动性等多项指标,对辅料种类、用量、工艺等条件进行考察,筛选处方的成型工艺。通过中试试验,最终确定处方的成型工艺。利用薄层色谱法对白花香莲解毒颗粒中白花蛇舌草、三叶香茶菜进行薄层鉴别。用HPLC法测定白花蛇舌草的特异性成分去乙酰车叶草酸甲酯的含量。根据《中国药典》2015年版颗粒剂制剂通则的要求对白花香莲解毒颗粒进行检查。按照中药民族药研发的要求,以外观性状、薄层鉴别、检查、含量测定考察白花香莲解毒颗粒的稳定性。采用最大给药量法评价白花香莲解毒颗粒的急性毒性。体外用药后通过荧光定量PCR技术检测HBV 1.3P细胞的HBV DNA表达水平;采用化学发光法检测细胞内HBs Ag、HBe Ag的表达量;采用间接免疫荧光法检测细胞内HBe Ag的表达强度。结果:白花香莲解毒颗粒的最佳提取工艺为:加10倍量水,提取2次,每次1.5h;成型工艺为:按稠膏:糊精=1:2比例加入糊精,以糊精稠膏混合物总量的0.25%的阿司帕坦和0.25%甜菊素作为矫味剂,再加入75%乙醇作为润湿剂,混匀,过14目筛制粒,80℃鼓风干燥,整粒,即得。采用薄层色谱法鉴别白花蛇舌草和三叶香茶菜。鉴别结果供试颗粒溶液在与对照品溶液和对照药材溶液的相同位置上有相同颜色的斑点,阴性颗粒在相应位置无干扰。HPLC法测定去乙酰车叶草酸甲酯的含量,结果线性关系良好,精密度、稳定性、重复性、回收率均符合规定。白花香莲解毒颗粒的检查结果符合《中国药典》2015年版颗粒剂制剂通则项下的规定。稳定性考察结果显示,三批中试颗粒外观性状、薄层鉴别、检查、含量测定等方面均符合规定,说明该制剂在模拟市售包装贮藏6个月期间质量稳定。急性毒性试验过程中,经最大剂量多次给药后,试验组小鼠的活动状态、摄食、饮水、排泄等情况均正常。整个实验期间,小鼠无死亡、中毒现象;小鼠体重呈增长趋势,与对照组比无显著性差异(P>0.05);主要脏器经剖检体积、颜色、质地未发现明显异常改变;主要脏器系数与对照组比无显著性差异(P>0.05)。抗病毒实验结果表明,在用药量不影响感染HBV肝细胞增殖的情况下,持续用药的时间越长,对HBV的抑制作用越强;用药量的增加对HBV的抑制作用也在增强。结论:优选出的白花香莲解毒颗粒的制备工艺,方法合理、可行,制定的质量标准可有效控制该制剂的质量。该制剂无明显急性毒性,安全性好,体外具有抗乙肝病毒的作用。