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目的用硅肺患者肺泡巨噬细胞的上清培养液刺激人肺成纤维细胞（MRC-5）建立体外硅肺模型;应用RNA干扰技术沉默MRC-5中IGFBP5基因,免疫细胞化学法和ELISA法检测MRC-5细胞中I型和III型胶原的表达和含量,探讨IGFBP5基因与硅肺纤维化的关系。方法1体外硅肺模型建立:于应急管理部尘肺病康复中心取得II期硅肺患者的支气管肺泡灌洗液中的肺泡巨噬细胞,体外培养18h后收集用含SiO2（50μg/ml）的培养液刺激肺泡巨噬细胞所获得条件培养上清,用条件培养上清与MRC-5共孵育建立体外硅肺模型。2 IGFBP5干扰质粒构建及最佳干扰质粒的选择:上海吉玛公司构建IGFBP5干扰质粒及阴性质粒,将干扰质粒及阴性质粒转染入MRC-5内,48h后采用RT-PCR和Western blot法筛选出干扰效率最高的载体。3实验分组:分为空白组（C）、SiO2刺激组（S）、质粒转染组（T）和阴性质粒转染组（N）。4 MRC-5中I型和III型胶原蛋白的表达和含量的测定:各组MRC-5培养12小时（半天）、24小时（一天）、36小时（一天半）、48小时（两天）和60小时（两天半）后,ICC法和ELISA法检测两种胶原蛋白的表达和含量。结果1大容量双肺灌洗术后灌洗液中获得含有大量活化的巨噬细胞,经二氧化硅粉尘二次刺激后获得条件培养上清。2条件培养上清能有效地刺激MRC-5细胞产生I、Ⅲ型。3干扰质粒转染后激光共聚焦显微镜下观察质粒:脂质体LipofectamineTM2000=2ug:3ul时,细胞转染效率最高。4通过RT-PCR、Western-blot方法检测四种质粒转染后IGFBP5mRNA和蛋白的表达,四种质粒都能不同程度的沉默IGFBP5基因,干扰质粒转染MRC-5细胞的IGFBP5的mRNA和蛋白的相对表达量较空白组均有降低,四组质粒转染组蛋白的相对表达量与阴性质粒转染组相比,与对照组相比,均具有统计学意义,RT-PCR方法（F=156.478,P<0.05）,Western-blot方法（F=967.144,P<0.05）,其中质粒A的效果最明显,降低IGFBP5的蛋白效果最好。5 ICC法和ELISA法检测MRC-5中的I、III型胶原的表达和含量相同时间点C组MRC-5中的I、III型胶原的表达和含量最低,S组和N组MRC-5中的I、III型胶原的表达和含量最高,S组和N组表达无差别,P>0.05。T组MRC-5中的I、III型胶原的表达和含量明显低于S组和N组,高于C组,两两比较差异有统计学意义,P<0.05。同一组不同时间点比较MRC-5中的I、III型胶原的表达和含量,12h、24h、36h、48h、60h五个时间点,可见I型胶原的表达和含量36h小时达到峰值,III型胶原的表达和含量48h小时达到峰值。结论1利用RNA干扰技术,将IGFBP5-SiRNA转染入MRC-5细胞内,可有效抑制IGFBP5基因的表达。2沉默硅肺相关上调基因IGFBP5后,经AM上清刺激的MRC-5细胞内I、III型胶原蛋白表达量减少。图10幅;表7个;参77篇。