论文部分内容阅读
一．研究背景和目的皮肤鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)是一种皮肤恶性肿瘤，起源于表皮和皮肤附属器角质形成细胞，目前病因仍不清楚。Wnt/β-catenin信号通路，即经典的Wnt信号通路，在生物的结构形成、细胞分化、形态发生和肿瘤进展等方面起着重要作用。在发生肿瘤的机体中，β-联蛋白(β-catenin)的代谢平衡紊乱，从而导致β-catenin在胞浆水平上升，进而进入细胞核，与核内T细胞转录因子/淋巴样增强因子(T cell factor/lymphoid enhancer factor，TCF/LEF)结合，激活TCF/LEF下游基因转录，导致调控肿瘤生长、分化、侵润的β-catenin/TCF信号通路的靶基因的调节改变，致使肿瘤发生的可能性增加。TCF/LEF属于高迁移率组蛋白(High Mobility Group，HMG)，具有高度保守的结构，是核内转录因子，其成员包括TCF-1、LEF1、TCF-3和TCF-4。其中，TCF-4是近年研究证实的与肿瘤关系最为密切的转录因子。近年研究报道，TCF4在肺癌、肾癌、结肠癌、胃癌、肝癌等肿瘤发生过程中表达明显增强，而在这些肿瘤肿瘤发生过程中共同的早期事件是异常升高的TCF4刺激下游靶基因表达。研究报道，作用于β-catenin/TCF的抑制剂，可以有效的控制肿瘤的形成、侵袭及转移，目前在这一领域的研究具有非常广阔的前景和深远的意义。本研究以皮肤鳞状细胞癌细胞株A431为研究对象，研究TCF4对A431细胞株生物学行为的影响，探索β-catenin/TCF通路在皮肤鳞状细胞癌中的作用，阐明皮肤鳞状细胞癌的发病机制，为寻找其新的治疗靶点，改善患者的预后提供理论依据。二、实验方法和结果1、设置实验分组：未转染组、转染control siRNA组和转染TCF4siRNA组。2、采用siRNA表达载体技术，转染control siRNA及si-TCF4RNA至A431细胞株，提取总RNA，供后续实验用。3、采用RT-PCR方法检测转染si-TCF4RNA后，A431细胞株TCF4mRNA表达的变化。4、提取A431细胞株蛋白，免疫印迹法(Western blot)检测转染si-TCF4RNA后A431细胞株TCF4蛋白的表达变化。5、Transwell方法检测转染si-TCF4RNA后，A431细胞株细胞的迁移和侵袭能力变化。6、CCK-8方法检测转染si-TCF4RNA后，A431细胞株的增殖力变化。7、流式细胞术检测转染si-TCF4RNA后，A431细胞株的细胞周期变化。8、结果证实，与未转染组和转染control siRNA组相比，转染TCF4siRNA有效地下调了A43l细胞株的TCF4mRNA及蛋白的表达水平。TCF4受到抑制后，431细胞的迁移能力及侵袭能力明显下降(p＜0.05)，细胞的生长增殖也受到抑制(p＜0.05)。流式细胞术检测细胞周期发现，在皮肤鳞状细胞癌细胞株中，TCF4siRNA可阻滞细胞于G2/M期。三、结论1、si-TCF4可抑制皮肤鳞状细胞癌A431细胞TCF4mRNA和蛋白的表达。2、TCF4可促进皮肤鳞状细胞癌A431细胞株的增殖、迁移和侵袭。3、抑制TCF4后，可抑制皮肤鳞状细胞癌A431细胞株的生长。通过以上实验，为进一步了解Wnt/β-catenin信号通路在皮肤鳞状细胞癌中的调控机制奠定了基础，实验结果提示TCF4可作为皮肤鳞状细胞癌潜在的基因治疗靶点。