目的:研究人参皂苷(ginsenosides)Rg1和Rb1促进中枢神经递质释放作用的机制。人参皂苷对中枢神经系统的影响已经得到广泛研究,结果表明其对多种神经递质的释放均起着调节作用。突触蛋白synapsins磷酸化在递质释放过程中发挥关键作用。我们研究目的是了解Rg1和Rb1调节神经递质释放是否与PKA引起的synapsins磷酸化水平有关。方法:本实验在PC12细胞水平上采用HPLC法测量Rg1和Rb1对中枢神经递质谷氨酸释放作用的比例,细胞免疫染色法和细胞水平以及动物突触体水平上采用western blotting法检测Rg1和Rb1对突触蛋白(synapsins)磷酸化水平的影响。首先进行神经递质释放测定,即均匀接种PC12细胞于预先用多聚赖氨酸包被的直径为35mm培养皿中。细胞生长72小时后进行试验。37°C,PBS充分清洗培养皿中培养基,加KRH缓冲液孵育10min。抑制剂组于孵育前30min加入H89。孵育结束后,各皿加入800μl的KRH缓冲液,1min后全部吸进至eppendorf管,4°C保存。此后于2,3,4,5,6,7min时重复上述操作。其中于2min结束时加入浓度为10μmmol·L-1的Rg1和Rb1。高压液相(HPLC)法测谷氨酸含量。接着进行细胞免疫荧光染色分析synapsins磷酸化变化,即即均匀接种细胞于预先用多聚赖氨酸包被的盖玻片上,盖玻片置于六孔板中。细胞生长72小时后进行实验。