介体调控Mangrovibacter plantisponsor还原Cr(Ⅵ) 的酶学特性及机理研究

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铬及其化合物是重要的工业原料,其广泛应用虽产生了较高的经济价值,但也造成了严重的铬污染。本研究利用分离自某制革厂的一株具有醌呼吸作用的高效Cr(Ⅵ)还原菌(Mangrovibacter plantisponsor,Genbank 登录号为 No.KF540843),以K2CrO4为模型污染物,选用蒽醌-2-磺酸钠(AQS)作为氧化还原介体,开展AQS调控M.plantisponsor还原Cr(Ⅵ)的酶学特性与机理研究。利用多种表征手段如扫描电子显微镜及能谱分析(SEM&EDS)、透射电子显微镜分析(TEM)、傅里叶红外光谱分析(FT-IR)、X射线衍射分析(XRD)和X射线光电子能谱分析(XPS)等对Cr(Ⅵ)还原产物进行多角度分析,结果表明Cr(Ⅵ)的毒性对菌体形态产生了一定的影响,Cr(Ⅵ)还原产物主要以Cr(Ⅲ)形式沉积在细胞外周,推测该还原过程主要发生在细胞膜上。从介体、电子供体、抑制剂等方面探讨M.plantisponsor还原Cr(Ⅵ)的酶学特性,结果表明AQS和NADH都可加速酶对Cr(Ⅵ)的还原,且胞外酶的比活力最大,膜上酶的蛋白含量最高;一定范围内,Cr(Ⅵ)的初始浓度越高,还原酶的Cr(Ⅵ)去除率越低。Cr(Ⅵ)还原酶的最适反应温度在35~45℃,最适pH在7左右。引入八种链抑制剂Cu2+、鱼藤酮、辣椒素、双香豆素、quinacrine、CCCP、DCCD、NaN3,探讨AQS调控M.plantisponsor还原Cr(Ⅵ)过程的电子传递机制,结果表明鱼藤酮对Cr(Ⅵ)还原过程有所抑制,说明NADH-CoQ氧化还原酶参与了 AQS调控M.plantisponsor还原Cr(Ⅵ)的电子传递过程;辣椒素、DCCD对Cr(Ⅵ)还原过程有明显的促进作用,推测NADH脱氢酶、ATP合成酶可能与AQS争夺电子,主要用于细菌自身的代谢,并非Cr(Ⅵ)的还原,是Cr(Ⅵ)还原过程电子传递的限速步骤;双香豆素和NaN3的促进作用不明显,推测甲基萘醌、细胞色素氧化酶基本不参与AQS调控M.plantisponsor还原Cr(Ⅵ)的电子传递过程。
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