脱墨微生物的筛选及应用

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根据主流酶法脱墨机制,经富集、初筛和多轮复筛,成功的从造纸厂采集的土样中,分离得到了5株具有良好脱墨能力的菌株。采用液体发酵的方法,从这5株微生物中筛选得到了一株脱墨能力最好的菌株M03-3#-001。形态学观察以及ITS序列分子鉴定结果表明,该菌属于烟曲霉。M03-3#-001菌株在100L发酵罐上的研究结果显示,发酵时间为84h,脱墨效果最佳,白度(ISO)增加值可达到3.42,此时发酵液CMC酶活力为855.23U/mL α-淀粉酶活力为5683.37U/mL,脂肪酶酶活力为18.75U/mL。对该菌株的脱墨条件进行研究,结果显示,脱墨反应的适宜时间为40min,适宜pH为8.0,适宜温度为30℃,最适用量0.2mL/g。从回收率方面考虑,M03-3#-001菌株发酵液超滤浓缩最佳条件:进口压力0.04MPa,出口压力0.00MPa,转速80r/min,在此条件下浓缩倍数对发酵液的浓缩回收率几乎无影响,回收率均可达到92%以上。Pearson相关分析表明,发酵液的脱墨效果与发酵液的pH值以及发酵液中淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶的含量呈正相关,相关系数按大小排列顺序为:脂肪酶>pH>纤维素酶>淀粉酶。M03-3#-001菌株原生质体制备与再生的研究结果表明:萌发8h的孢子、纤维素酶浓度150mg/mL、溶壁酶浓度150mg/mL、溶菌酶浓度5mg/mL、酶解时间为2.5h、0.7mol/LKCl作为渗透压稳定剂,在此条件下原生质体的制备率和再生率分别为84.31%和26.67%。M03-3#-001菌株原生质体UV-LiCl复合诱变研究结果表明:LiCl浓度为1%、紫外照射时间为80s,原生质体的致死率可达到95%,通过原生质体复合诱变选育出了一株遗传性状稳定的突变株UL-167,其脱墨效果可达到3.93,比出发菌株M03-3#-001提高了17.45%。使用遗传算法优化后的BP人工神经网络模型预测了发酵液中纤维素酶、脂肪酶和淀粉酶的含量。其中,淀粉酶的预测值与实测值的相对误差在5%以内,纤维素酶和脂肪酶的预测值与实测值的最大相对误差控制在10%以内。
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