坦布苏病毒(Tembusu，TMUV)是禽坦布苏病毒病的主要病原。2010年4月坦布苏病毒病开始在我国东南沿海养鸭场爆发，引起产蛋鸭产蛋量大幅度下降、并伴随感染鸭死亡，给我国沿海地区养鸭业带来了严重的经济损失。对该新发病毒进行深入研究以及建立一种能稳定检测该病毒的血清学方法，有助于该疫病的有效防控。本研究体外重组表达了TMUV囊膜E蛋白的截短蛋白，并制备了其单克隆抗体(monoclonal antibody，mAb)，利用制备的单抗分析了识别E蛋白的抗原区域。同时以原核表达的重组截短E蛋白为包被抗原，建立了间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测方法，用于TMUV血清抗体的检测。　　本文根据实验室已经分离的坦布苏病毒YY1株全基因组序列，设计特异性引物，以YY1毒株的核酸为模板，通过RT-PCR法扩增了除去YY1 E基因疏水区和跨膜区的编码截短E蛋白基因，然后克隆到pET-28a(+)原核表达载体上。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3) plysS菌株，获得阳性重组菌，并在IPTG诱导下成功表达了His标签的融合截短E蛋白。采用Ni-NTA镍柱纯化出较高纯度的重组蛋白，命名为His-YY1E。　　以纯化的His-YY1E蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠，经过三次免疫和一次加强免疫后，取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合。经过HAT和HT选择培养基初步筛选融合的杂交瘤细胞;再经过间接ELISA和间接免疫荧光抗体实验(IFA)筛选后，最终筛选出4株能稳定分泌抗截短E蛋白抗体的细胞株。将特异性的细胞株腹腔注射小鼠制备YY1E单克隆抗体腹水，经鉴定发现:4株抗截短E蛋白的单克隆抗体在Westemblot和IFA检测中均能特异性地与原核表达重组蛋白及TMUV感染细胞中天然E蛋白反应。进一步通过转染截短蛋白E不同区域截短体与pEGFP-C3构建的真核表达载体质粒，IFA检测结果显示，1C5、3B11、3C5、3F5单抗识别的截短E蛋白抗原区域位于C端35个氨基酸（105个碱基）之间。　　最后本研究对鸭坦布苏病毒血清抗体检测方法进行了初步研究，即建立了基于原核表达重组截短E蛋白为包被抗原的ELISA检测方法。并优化E蛋白包被的ELISA检测条件，E蛋白包被最佳工作条件为碳酸盐缓冲液稀释包被抗原至3.5μg/mL，4℃过夜包被抗原，1％BSA封闭，1∶100稀释待检测血清，37℃孵育30min，1∶8000稀释HRP羊抗鸭，37℃孵育1h，TMB底物37℃反应10min后终止反应，读取OD450数值。当OD值＞0.213时判定为阳性，OD值＜0.213时判定为阴性。同批抗原制备的不同检测板变异系数(CV)值在3％-14％之间，不同批抗原制备的检测板CV值在3％-17％之间。本方法与Westernblot筛选临床血清结果相比，阳性符合率为98.8％、阴性符合率为93.5％、总符合率为96.6％。上述结果表明:建立的ELISA检测方法可作为临床血清样品检测的一种有效方法。