修饰玉米芯亲和吸附剂的制备及对蛋白质的吸附研究

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蛋白质(protein)是生命的物质基础,没有蛋白质就没有生命。因此,人类对蛋白质的研究越来越多,而各种蛋白质的分离纯化工作也成为生物化学中的一项艰巨而繁重的任务。本文选用天然生物质—玉米芯作为研究对象,其表面含有丰富的羟基等官能团,易于交联、修饰,且玉米芯在我国来源广泛、价廉易得,降低了制备吸附剂的成本。但玉米芯作为一种生物吸附剂存在吸附选择性差、再生较困难等多种问题。很多文献报道了用酸化、碱化等简单的物理化学方法来改善玉米芯的吸附性能,结果均不理想。针对以上问题,本文以玉米芯为原料,通过交联、修饰反应,用不同金属离子螯合制得一批新的吸附剂。研究了吸附剂对溶菌酶、牛血清白蛋白、过氧化氢酶三种蛋白质的吸附行为。具体工作如下:1、将玉米芯预处理得到玉米芯纤维素,通过环氧氯丙烷交联、亚氨基二乙酸修饰,再用金属铜离子螯合制得吸附剂,借红外光谱、XPS能谱对产物进行表征。以溶菌酶、牛血清白蛋白、过氧化氢酶为吸附对象进行了一系列吸附条件实验(包括溶液的酸度、蛋白质的初始浓度、离子强度等)。结果发现,吸附溶菌酶的最佳吸附条件为pH11.0、25℃、吸附12h,最大吸附容量为308.7mg.g-1。Langmuir吸附模型更适合模拟金属铜离子螯合亲和吸附剂吸附溶菌酶的吸附等温线(R2>0.99),拟合的理论最大吸附容量为307.6mg.g-1,与实验值接近。将金属螯合吸附剂用于提取鸡蛋清中的溶菌酶,用pH8.0、1.0mol.L-1NaSCN溶液洗脱,洗脱率为96.6%,活力收得率为72.1%,纯化倍数为28.6。用该吸附剂吸附牛血清白蛋白的最佳吸附条件为pH7.0、25℃、吸附12h,最大吸附容量为71.03mg.g-1。吸附过氧化氢酶的最佳吸附条件为pH6.5、25℃、吸附24h,最大吸附容量为120.3mg.g-1。Freundlich吸附模型更适合模拟吸附剂吸附过氧化氢酶的吸附等温线(R2>0.98)。将该金属螯合吸附剂用于提取猪心肌中的过氧化氢酶,用pH9.0、1.0mol.L-1NaSCN溶液洗脱,洗脱率为52.85%,活力收得率为58.4%,纯化倍数为8.6。2、用金属锌离子螯合制得锌亲和吸附剂,以溶菌酶、牛血清白蛋白、过氧化氢酶为吸附对象进行了一系列吸附条件实验。实验结果表明,吸附溶菌酶的最佳吸附条件为pH9.9、25℃、吸附2h,最大吸附容量为344.4mg.g-1。Langmuir吸附模型更适合模拟金属锌离子螯合亲和吸附剂吸附溶菌酶的吸附等温线(R2>0.99),拟合的理论最大吸附容量为346.96mg.g-1,与实验值接近。将金属螯合亲和吸附剂用于提取鸡蛋清中的溶菌酶,用pH8.0、1.0mol.L-1NaSCN溶液洗脱,洗脱率为91.9%,活力收得率为50.4%,纯化倍数为26.6。吸附牛血清白蛋白的最佳吸附条件为pH3.0、25℃、吸附10h,最大吸附容量为121.3mg.g-1。吸附过氧化氢酶的最佳吸附条件为pH8.0、25℃、吸附24h,最大吸附容量为30.4mg.g-1。Langmuir吸附模型更适合模拟吸附剂吸附过氧化氢酶的吸附等温线(R2>0.99),拟合的理论最大吸附容量为31.7mg.g-1,与实验值接近。将金属螯合吸附剂用于提取猪心肌中的过氧化氢酶,用pH9.0、1.0mol.L-1NaSCN溶液洗脱,洗脱率为66.9%,活力收得率为73.8%,纯化倍数为10.3。3、将螯合铁离子的吸附剂用于溶菌酶、牛血清白蛋白、过氧化氢酶的吸附并进行了比较。探索了溶液酸度、蛋白质的初始浓度、NaCl的浓度等因素对吸附的影响。结果发现,吸附溶菌酶的最佳吸附条件为pH8.5、25℃、吸附4h,最大吸附容量为283.1mg.g-1。Langmuir吸附模型更适合模拟金属铁离子螯合吸附剂吸附溶菌酶的吸附等温线(R2>0.99),拟合的理论最大吸附容量为282.2mg.g-1,与实验值接近。将金属螯合吸附剂用于提取鸡蛋清中的溶菌酶,用pH7.0、1.0mol.L-1NaSCN溶液洗脱,洗脱率为87.8%,活力收得率为64.6%,纯化倍数为33.5。吸附牛血清白蛋白的最佳吸附条件为pH3.0、25℃、吸附12h,最大吸附容量为99.4mg.g-1。吸附过氧化氢酶的最佳吸附条件为pH7.0、25℃、吸附24h,最大吸附容量为139.9mg.g-1。Freundlich吸附模型更适合模拟吸附剂吸附过氧化氢酶的吸附等温线(R2>0.98)。将金属螯合吸附剂用于提取猪心肌中的过氧化氢酶,用pH9.0、1.0mol.L-1NaSCN溶液洗脱,洗脱率为55.9%,活力收得率为62.3%,纯化倍数为12.1。4、选用金属镍为螯合剂制得新的吸附剂,以溶菌酶、牛血清白蛋白、过氧化氢酶为吸附对象进行了吸附条件的探索,实验结果表明,吸附溶菌酶的最佳吸附条件为pH10.0、25℃、吸附8h,最大吸附容量为280.9mg.g-1。Langmuir吸附模型更适合模拟金属镍离子螯合吸附剂吸附溶菌酶的吸附等温线(R2>0.99),拟合的理论最大吸附容量为279.0mg.g-1,与实验值接近。将金属螯合吸附剂用于提取鸡蛋清中的溶菌酶,用pH7.0、1.0mol.L-1NaSCN溶液洗脱,洗脱率为88.1%,活力收得率为43.8%,纯化倍数为14.3。吸附牛血清白蛋白的最佳吸附条件为pH3.0、25℃、吸附12h,最大吸附容量为69.0mg.g-1。吸附过氧化氢酶的最佳吸附条件为pH8.0、25℃、吸附24h,最大吸附容量为21.5mg.g-1。Langmuir吸附模型更适合模拟吸附剂吸附过氧化氢酶的吸附等温线(R2>0.91),拟合的理论最大吸附容量为21.7mg.g-1,与实验值接近。将金属螯合吸附剂用于提取猪心肌中的过氧化氢酶,用pH9.0、1.0mol.L-1NaSCN溶液洗脱,洗脱率为75.4%,活力收得率为73.5%,纯化倍数为14.9。
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