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第一部分保护素D1对小鼠急性肺损伤的保护作用 目的：研究保护素D1(PD1)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的影响及机制。 方法：40只雄性BABL/C小鼠随机分为正常对照组(NS组)、急性肺损伤组(LPS组),PD1组(P组)、PD1预先给药组(PL组)四组,每组各10只。P组和PL组尾静脉给予200ng的PD1预处理,NS组和LPS组则给予等体积的生理盐水,30min后LPS组和PL组以3mg/kg的LPS气管内滴入,NS组和P组则给予等体积的生理盐水。气管内滴入LPS或生理盐水后24小时处死小鼠,检测肺组织湿/干质量比(W/D)、髓过氧化物酶(MPO)活性、支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数、蛋白含量及TNF-α、IL-10的水平,HE染色光镜下观察肺组织病理学变化。 结果：与NS组相比,LPS组肺组织出现病理学改变,且W/D、MPO活性(u/g)、BALF中白细胞总数(104/ml)、蛋白含量(g/L)、TNF-α浓度(pg/ml)均显著升高(W/D:4.69±0.09比3.57±0.12;MPO:7.03±0.38比2.16±0.25;白细胞总数:71.8±6.8比4.5±0.5;蛋白含量:0.186±0.005比0.068±0.007;TNF-α:567±68.22比201.67±57.12,均P<0.05),BALF中IL-10浓度(pg/ml)显著降低(55.5±18.8比187.2±14.5,P<0.01);与LPS组相比,PL组肺组织病理学改变明显减轻,且W/D、MPO活性、BALF中白细胞总数、蛋白含量、TNF-α浓度均明显降低(W/D:4.37±0.06,MPO:3.73±0.24,白细胞总数:33.7±2.4,蛋白含量:0.115±0.008,TNF-α:414±28.51,均P<0.05),BALF中IL-10浓度(113.6±5.8,P<0.01)显著升高。NS组与P组间各指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。 结论：保护素D1可以减轻脂多糖诱导的小鼠急性肺损伤,其机制可能与其抑制中性粒细胞聚集,调节促炎因子及抗炎因子平衡有关。 第二部分保护素D1对脂多糖致内皮细胞损伤的保护作用 目的：研究保护素D1对血管内皮损伤的作用及其机制。 方法：体外培养人脐静脉内皮细胞,取生长良好的细胞分别加入不同浓度的PD1(终浓度10nmol/L、50nmol/L、100nmol/L)预处理及脂多糖(终浓度1mg/L)进行干预,并设空白对照组。MTT法检测细胞活力,RT-PCR方法检测细胞间粘附分子-1(ICAM-1)mRNA表达水平,荧光探针DCFH-DA测定细胞内活性氧(ROS)水平。 结果：PD1与脂多糖同内皮细胞孵育后没有引起细胞活力的明显变化(P>0.05),排除了实验模型中药物的毒性作用。与空白对照组相比,血管内皮细胞经LPS刺激后胞内ROS水平及ICAM-1mRNA的表达明显升高,50nmol/L、100nmol/L的PD1分别可使LPS诱导的ROS产生减少15％、45%(均P<0.05),100nmol/L的PD1可以使LPS诱导的ICAM-1mRNA表达降低58%(P<0.05)。 结论：PD1通过抑制LPS诱导的氧化应激及ICAM-1mRNA表达,从而对内皮细胞发挥保护作用,这为其在急性肺损伤中的应用提供实验依据。