论文部分内容阅读
小鹅瘟又称鹅细小病毒病(Goose Parvovirus, GPV)是雏鹅烈性传染病,主要侵害4～20日龄雏鹅和雏番鸭,该病的特点是传播快、致死率和发病率高,随着雏鹅日龄增长发病率和致死率下降。该病造成的经济损失十分严重,是目前养鹅业最主要的传染病之一。天然被动免疫是预防小鹅瘟的有效手段,主要是利用小鹅瘟弱毒疫苗和灭活疫苗免疫产卵母鹅使雏鹅获得母源抗体。本研究首次将鹅细小病毒黑龙江分离株98E株适应SPF鸭胚,采用鸭胚连续传代致弱的方法,培育出小鹅瘟鸭胚致弱株98D15株(简称GPV-98D15株),并评价其生物学特性,安全性及免疫原性。鹅细小病毒98E株在鸭胚上盲传至F10代仍没有死亡鸭胚,从F11代鸭胚逐渐死亡,F14代开始鸭胚全部死亡,随着传代次数增加,致死鸭胚的时间呈现规律性缩短。死亡鸭胚胚体有明显的充血、出血等病变,与GPV的病变特征相符；利用PCR技术成功地克隆了GPV-98D15株的NSl基因和VP1基因；其中VP1基因中,GPV-98D15鸭胚致弱株较GPV-98E亲本病毒有部分核苷酸序列突变；GPV-98D15株的鸭胚半数致死量、对鹅胚的致病力试验、安全性试验,说明GPV-98D15株的弱毒性稳定、安全性良好；鸭胚成纤维细胞半数感染量与间接免疫荧光(IFA)测定GPV-98D15株病毒能够感染鸭胚成纤维细胞；该致弱株与SYG(41～50)商品化疫苗进行免疫原性比较。通过间接ELISA、琼扩试验以及中和试验检测抗体的变化规律,结果发现免疫GPV-98D15株和SYG(41～50)株商品化疫苗的20日龄雏鹅抗体水平均不断上升,并在第5周达到最高峰,随后缓慢下降,但是GPV-98D15株免疫组的免疫效果与商品化SYG(41～50)疫苗株免疫组相比抗体水平略低,但并无显著差异(P>0.05)。中和试验检测到免疫GPV-98D15株能够使雏鹅产生不低于商品化SYG(41～50)株弱毒疫苗的GPV特异性中和抗体,使雏鹅获得免疫保护。本研究为小鹅瘟疫苗的生产提供一种安全、有效、不受季节限制的候选毒株,为小鹅瘟病毒的致弱机理研究提供物质基础。