SLE患者外周血中miR-301a和Th17细胞的变化

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目的:  通过检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者和健康对照者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclearcells,PBMC)中Th17细胞比例、miR-301a-3p与其靶基因PIAS3 mRNA的表达水平,分析miR-301a与PIAS3及Th17细胞的关系,初步探讨SLE患者PBMC中miR-301a和Th17细胞的变化。  方法:  1.从SLE患者和健康对照者外周血中分离血浆和PBMC,经PMA、Ionomycin和莫能霉素培养5h后,经过荧光抗体(FITC anti-humanCD3、PCY5 anti-human CD8和PE anti-human IL-17)标记,采用流式细胞术(flow cytometer,FCM)检测SLE患者和健康对照者PBMC中Th17细胞的比例。  2.通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chainreaction,qRT-PCR)检测SLE患者与健康对照者PBMC中RORCmRNA和STAT3 mRNA的表达情况,并进行统计学分析。  3.用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测SLE患者与健康对照者血浆中IL-1β、IL-6和IL-23的浓度,然后分析这些细胞因子在SLE患者体内的表达情况。  4.通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SLE患者与健康对照者PBMC中PIAS3 mRNA和miR-301a-3p的表达水平。将PIAS3 mRNA的表达水平分别与Th17细胞比例、RORC mRNA和STAT3mRNA的表达水平进行相关性分析;将miR-301a-3p的表达水平分别与Th17细胞比例、RORC mRNA和PIAS3 mRNA的表达水平进行相关性分析。  结果:  1.与健康对照组(0.653±0.410%)相比,SLE组(1.881±0.680%)PBMC中的Th17比例显著增高(P<0.0001)。  2.与健康对照组相比,SLE组PBMC中RORCmRNA(0.008±0.004 vs0.020±0.015, P=0.0471)和STAT3 mRNA(0.099±0.067 vs0.284±0.226,p=0.0047)的表达水平显著升高。  3.与健康对照组相比,SLE组外周血血浆中IL-1β(3.453±0.955pg/mlvs8.431±3.592pg/ml, p<0.0001)、IL-6(10.690±8.325pg/ml vs33.910±21.350pg/ml,p=0.0032)和IL-23(65.080±33.780pg/ml vs104.200±37.870pg/ml,p=0.0056)的浓度显著升高。  4.与健康对照组相比,SLE组PBMC中PIAS3 mRNA(0.098±0.034 vs0.064±0.041,P=0.0341)的表达水平显著下调。下调的PIAS3 mRNA表达水平与上调的RORC mRNA水平呈负相关(r=-0.6818,P=0.0208);而且与上调的STAT3 mRNA水平也呈一定程度负相关(r=-0.5330,P=0.0607);PIAS3 mRNA的表达水平与Th17细胞比例也有负相关趋势,但无统计学意义(r=-0.2912,P=0.3344)。  5.与健康对照组相比,SLE组PBMC中miR-301a-3 P(0.012±0.019 vs0.046±0.085,P=0.0434)的表达水平显著升高。miR-301a-3P的表达水平与RORC mRNA的表达水平呈正相关(r=0.6835,P=0.0070);与Th17细胞比例也呈明显的正相关(r=0.6813,P=0.0103);而与PIAS3 mRNA的表达水平呈负相关(r=-0.5604,P=0.0463)。  结论:  1.本研究发现SLE患者PBMC中Th17细胞表达水平明显增高,其特异性转录因子RORC和STAT3表达显著上调,血浆中IL-1β、IL-6和IL-23水平明显升高,提示SLE患者外周血中Th17细胞异常增加,并且与疾病发生发展密切相关。  2.SLE患者PBMC中miR-301a的表达水平明显上调,而其特异性靶基因PIAS3的表达水平明显下调,miR-301a与PIAS3呈负相关,miR-301a与Th17细胞比例呈现正相关。提示SLE患者PBMC中miR-301a的过表达可以抑制PIAS3的表达,从而促进STAT3的活化,上调转录因子RORC的表达,进而增加Rh17细胞的比例。初步推测miR-301a在SLE的临床诊断中具有潜在的意义。
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