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目的：为明确湖南人群中非综合征性耳聋患者发病的遗传学基础,分析了患者GJB2基因突变的情况,并探索其发病的分子机制。方法：经过详细的病史询问和临床检查,收集了符合要求的、无亲缘关系的非综合征耳聋患者140例。PCR扩增患者GJB2基因的编码序列全长,纯化回收扩增产物,直接双向测序,用DNAStar软件分析测序结果,统计患者GJB2基因突变情况。选择研究中发现的突变,设计引物扩增突变体全长,将其构建到pEGFP表达载体,经菌液PCR检测、双酶切鉴定并测序验证之后,转染Hela细胞,行Western blot检测,荧光染色后在荧光显微镜下观察Cx26的表达情况,比较野生型与突变体之间亚细胞定位的差别；计数它们形成间隙连接通道的细胞数目,统计分析是否存在差异。结果：在140个无亲缘关系的耳聋患者中,共有56例检测到了Cx26基因突变,检出率达40%（56／140）；其中29例患者两个Cx26等位基因都发生突变,另27例患者只有一个Cx26等位基因突变,等位基因突变率为30.4%（85／280）。一共发现了10种不同的碱基变异,包括7种致病突变和3种多态。7种致病突变分别是无义突变c.139G>T；移码突变c.176191del 16和c.235delC;错义突变c.109G>A、c.344T>G、c.550C>T和c.571T>C。c.344T>G是一个新报道的错义突变。最常见的突变是235delC,共有27个患者检测到该突变,比例达19.3%（27／140）,其中纯合突变20例,复合杂合突变2例,杂合突变5例,占所有致病性等位基因的55.3%（47／85等位基因）。109G>A突变频率仅次于235delC,有25个患者检测到该突变,检出率达17.9%（25／140）,其中纯合突变7例,杂合突变18例,占所有致病性等位基因的37.6%（32／85等位基因）。选择在患者中发现的突变,构建了Cx26 wt及其突变体的真核表达载体：pEGFP-Cx26 wt, pEGFP-Cx26 V37I和pEGFP-Cx26F115C；转染Hela细胞后,成功表达Cx26 wt及其突变体的GFP融合蛋白；但是突变体在细胞定位和分布上与Cx26 wt无区别,形成通道的细胞数目也没有明显的差异。结论：Cx26是导致湖南人群NSHL的最常见的基因,其235delC突变是湖南人群NSHL最常见的突变；Cx26基因p.F115C和p.V37I两种突变体转染Hela细胞后,不影响其形成细胞间隙连接的能力,但其形成的间隙连接是否有正常功能还有待进一步研究。