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目的:①获得并纯化金属酶新亚型IMP-38重组蛋白。②探讨IMP-38基因的遗传环境。③了解产IMP-38肺炎克雷伯菌菌株毒力基因分布。 方法:⑴构建PUC19/IMP-38重组质粒验证IMP-38基因序列。⑵构建原核表达载体pet-28a+/IMP-38,对目的基因诱导表达、纯化及复性。⑶提取9株产IMP-38菌株基因组DNA,采用普通PCR、长片段PCR和重叠延伸PCR探讨IMP-38基因与整合子、转座子关系。⑷提取9株产IMP-38菌株基因组DNA,PCR检测7种荚膜血清型基因和25种毒力基因。 结果:①成功构建PUC19/IMP-38重组质粒,证明前期测序结果完全正确,确定本研究IMP基因为IMP新亚型-IMP-38。②成功构建原核表达载体pet-28a+/IMP-38,目的基因大量表达且获得纯度较高的重组蛋白。③IMP-38基因位于Ⅰ类整合子上,后者位于转座子Tn402-like上。产IMP-38菌株上携带mer1696操纵子、Tn5051转座子,且存在tnp513、IS26、tnpU和IS5075等遗传标记。④9株产IMP-38肺炎克雷伯菌中发现了4株产9种毒力基因菌株,分别为fimH1、mrkD、ycfm、kpn、entB、irp-2、uge、wabG和ureA,未发现其他毒力基因和上述荚膜血清型基因。 结论:⑴本研究IMP基因为IMP新亚型-IMP-38。⑵成功构建原核表达载体pet-28a+/IMP-38,获得纯化的重组蛋白。⑶IMP-38基因位于Ⅰ类整合子上,后者位于Tn402-like转座子上,产IMP-38菌株还存在其他类型转座子和插入序列。⑷同一克隆型细菌携带的毒力基因并不相同,检测毒力基因十分必要。