hNIS基因转导黑色素瘤细胞介导放射性碘摄取的实验研究

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钠/碘同向转运体(NIS)是一种真正调节甲状腺及其他组织碘转运活性的膜蛋白。NIS在甲状腺的病理生理中发挥着关键性作用,它实现了甲状腺组织摄取碘并进行甲状腺素的生物合成,实现了甲状腺功能亢进和分化型甲状腺癌的显像诊断和放射性碘治疗。近年来,对NIS的进一步分子学研究表明,NIS有可能对甲状腺及非甲状腺肿瘤的诊断和放射性碘治疗产生更加深远的影响。 目的 获取人钠/碘同向转运体(hNIS)基因cDNA,研究其转导黑色素瘤细胞在体外和体内能否介导放射性碘摄取,从而探索该策略用于黑色素瘤放射性碘治疗的可能性。 方法 运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法从人甲状腺组织总RNA中扩增出hNIS基因cDNA序列,将其克隆至pUCm-T载体并亚克隆至真核载体pcDNA3中,电转化法分别将含hNIS基因的重组质粒pcDNA3-hNIS及空质粒pcDNA3转导黑色素瘤细胞(B16),分别建立了细胞系B16-A和B16-B。在体外培养条件下检测其对放射性碘的摄取及碘外流的情况,继而将三种细胞(B16-A、B16-B、B16)分别接种于C57小鼠右侧腹部皮下,当肿瘤生长至直径约1厘米时进行131I全身显像和肿瘤摄取125I动态定量测定。 结果 我们成功克隆到了hNIS基因,并建立了能稳定表达hNIS基因的新型细胞系B16-A和单转空质粒pcDNA3的细胞系B16-B。B16-A细胞的 hNIS基因转导黑色素瘤细胞介导放射性碘摄取的实验研究中文摘要摄碘能力较B16细胞高17倍,较单转空质粒pcDNA3的细胞系B16沼高19倍。碘的外流过程也十分迅速,T;/2e ff仅约10分钟。体内实验发现B16--A细胞所成肿瘤见明显的放射性碘摄取,腹腔注射’25工后1、2、4、12、24小时每克肿瘤组织摄取‘牡注射剂量百分数(q0工D/g)为12.22士0.71、10.91士0.72、8.73士0.99、1.24士 0.29、0.19士0.03,’251在肿瘤组织内的生物半衰期约为6小时。对照组B16和B16一B细胞所成肿瘤未见放射性碘的摄取,腹腔注射’气后1、2、4、12、24小时每克肿瘤组织摄取注射,25工剂量百分数(%工D/g)的差别无统计意义(P>0.05),将二组合并成一组后,各时相的%ID/g为2.34士0.26、0.61士0.06、0.33士0.03、0.09士0.02、0.02士0.01。B16一A细胞所成肿瘤摄碘量与对照组相比较,P<0.01,差别具有高度统计意义。 结论初步研究表明,在体外培养及体内成瘤条件下,hNIS基因转导黑色素瘤细胞其本身足以介导放射性碘的摄取,但有效半衰期较短,难以产生足够的治疗剂量,有必要进一步研究如何进一步增加放射性碘的摄取量及延长碘在细胞内的滞留时间,从而提高其放射生物学效应。
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