【摘 要】
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目的：研究用RNAi技术下调胰腺癌Panc-1细胞平衡型核苷载体1(human equilibrativenucleoside transporter 1，hENT)对氟尿嘧啶(5-Fluorouraci，5-FU)细胞毒性的影响。 方法：设计
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目的：研究用RNAi技术下调胰腺癌Panc-1细胞平衡型核苷载体1(human equilibrativenucleoside transporter 1，hENT<,1>)对氟尿嘧啶(5-Fluorouraci，5-FU)细胞毒性的影响。
方法：设计并合成两个能表达特异性针对hENT<,1>的shRNA(small hairpin RNA)的DNA序列，分别与载体质粒pSilence 4-1-CMV neo连接重组，构建针对hENT<,1>的shRNA表达质粒pSilence-hENT<,1>Sa和pSilence-hENT<,1>Sb。用脂质体法将pSilence-hENT<,1>Sa和pSilence-hENT<,1>Sb转染胰腺癌Panc-1细胞，并以含G418(600ug/ml)的培养液筛选阳性转染细胞(pSilence-hENT<,1>Sa Panc-1及pSilence-hENT<,1>Sb Panc-1)。RT-PCR检测pSilence-hENT<,1>Sa Panc-1及pSilence-hENT<,1>Sb Panc-1细胞中hENT<,1>-mRNA的下调效果及稳定性，选择干扰效果较好的pSilence-hENT<,1>Sb Panc-1细胞进一步实验；用MTT法检测细胞在含序列浓度5-FU(0～2×10 ng·L<-1>)的培养液中48h后的生存率，并计算IC<,50>。
结果：测序显示重组质粒中插入片段序列正确。RT-PCR结果显示pSilence-hENT<,1>SbPanc-1细胞hENT<,1>的mRNA表达水平下调，并在两个月内保持相对稳定。MTT结果显示pSilence-hENT<,1>Sb Panc-1细胞组氟尿嘧啶的IC<,50>显著下降，为Panc-1细胞组IC<,50>的51.52％(P<0.01)。
结论：用RNAi方法下调hENT<,1> mRNA表达可增强5-FU对胰腺癌细胞的毒性，hENT<,1>将可能成为提高化疗效果的新的药物作用靶点。
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