【摘 要】
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随着全球气候的变化、生态环境的不断恶化、城镇化程度的加快、各国之间的贸易往来频繁及交通工具运输的快捷便利,全世界蚊媒传染病发病呈上升趋势,已有蚊媒传染病的流行区域
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随着全球气候的变化、生态环境的不断恶化、城镇化程度的加快、各国之间的贸易往来频繁及交通工具运输的快捷便利,全世界蚊媒传染病发病呈上升趋势,已有蚊媒传染病的流行区域不断扩大、疾病的流行频度不断加强。内蒙古拥有广袤的草原,水草丰茂,牛羊较多,与蒙古国,俄罗斯相接壤,边境线很长,独特的气候环境和地理环境给蚊虫带来滋生的空间。为了解内蒙古呼伦贝尔和锡林郭勒盟边境地区优势蚊虫种类,并对其保守基因COI的基因多态性分析。应用传统形态学和分子生物学相结合的方法,对该地区10个采样点进行蚊虫种型的鉴定和基因多态性分析,并对蚊虫体内是否携带西尼罗病毒初步进行检测。方法:在2018-2019年间,从内蒙古呼伦贝尔地区和锡林郭勒盟地区的草地上采集蚊虫样本。通过传统形态学鉴定方法,对蚊虫样本进行显微镜下观察后初步确定其种型。再采用聚合酶链式反应(PCR)对蚊虫的线粒体细胞色素C氧化酶I基因(COI)基因序列进行扩增,测序后对蚊虫的基因序列进行同源性分析和遗传进化分析,即应用Mega6.06软件构建系统进化树,与GenBank数据库中已知蚊虫的COI基因进行聚类分析,以确定蚊子进化的规律;通过相关生物软件分析其碱基组成成分、不同位点碱基替换类型、遗传距离,和基因单倍型多样性。在相继研究中,根据西尼罗病毒的E2蛋白基因,采用TaqMan实时荧光定量PCR方法对10个采样点的蚊虫样本初步检测西尼罗病毒。结果:在两个项目地区,共采集6000余只蚊虫,经过形态学和分子生物学方法分析发现,7个采样点的蚊虫属于伊蚊背点骚扰蚊,3个采样点的蚊虫属于摇蚊,呼伦贝尔地区均为伊蚊背点骚扰蚊,锡林郭勒地区3个采样点为伊蚊背点骚扰蚊,其余3个采样点为摇蚊。COI基因的碱基成分分析显示A+T的含量明显高于G+C的含量,单倍型多样性分析发现2种蚊子的单倍型多样性均较高,其中Hap1-Hap4是共有的基因单倍型,是较原始的单倍型基因,且不同地区的蚊虫之间存在显著的基因多样性。充分表明项目区蚊虫的遗传资源比较丰富;通过检测样品数量的33%,结果显示目前在内蒙古的这2个地区蚊虫体内未发现西尼罗病毒。结论:背点骚扰蚊,摇蚊是内蒙古呼伦贝尔和锡林郭勒地区优势蚊种,且不同采样地区的蚊子之间存在着较丰富的基因多样性;经过TaqMan实时荧光定量PCR方法检测,该地区蚊虫体内未发现西尼罗病毒。
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