研究目的:血管性痴呆(vascular dementia,VD)是指由缺血性卒中、出血性卒中和造成记忆、认知和行为等脑区低灌注的脑血管疾病所致的严重认知功能障碍综合征。VD的发病机制与炎症反应、氧化应激、Aβ异常沉积等多个病理机制有关,涤痰汤是临床治疗痴呆的经典方剂,可有效改善VD患者的认知功能障碍。涤痰汤属于中药复方,治疗疾病具有多途径、多基因、多靶点的优势。本试验拟通过改良双侧颈总动脉永久阻断法(2-VO)制备VD大鼠模型,对VD大鼠行为及记忆能力、海马组织HE染色、氧化应激、炎症反应及mi RNA-124/BACE1/Aβ信号通路等多方面进行研究,多角度多层次探讨涤痰汤治疗VD的作用机制。研究方法:一理论探讨:从中医基础理论探讨VD的病因、病机、治则、治法和方药,提出痰浊阻窍是VD发生认知障碍的病机中心环节,从临床研究以及中药成分研究分析涤痰汤治疗VD的可行性。二动物实验:1.SPF级Wistar大鼠50只适应性饲养1周后开始实验,随机分为5组,即假手术组、模型组、涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组、盐酸多奈哌齐组,每组10只。通过改良双侧颈总动脉永久阻断法(2-VO)制备VD大鼠模型,每组大鼠给与相应干预措施,2.采用Morris水迷宫实验观察VD大鼠认知功能的改变,通过HE染色用光学显微镜观察大鼠海马组织形态学变化,探讨涤痰汤对VD大鼠认知功能障碍以及海马组织病理损伤的治疗作用。3.通过免疫组化法检测NOX2蛋白表达,Western blot法检测海马组织HO-1蛋白表达,生化方法检测海马组织ROS、GSH含量检测,来探讨涤痰汤对VD大鼠氧化应激损伤的影响。4.通过免疫组化法检测NF-кB的表达,Western blot法检测海马组织TNF-α蛋白表达,ELISA检测海马组织IL-1β、IL-10含量,探讨涤痰汤对VD大鼠炎症反应的影响。5.通过PCR检测海马组织中mi R-124的表达,western blot法检测海马组织中BACE1的表达,免疫组化法检测海马组织中Aβ的表达,探讨涤痰汤基于mi RNA-124/BACE1/Aβ通路对VD模型大鼠的治疗作用。研究结果:1.定位航行实验结果:与假手术组比较,VD模型组大鼠的逃避潜伏期明显延长(P<0.01)。与模型组比较,涤痰汤高剂量组的逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),西药组及涤痰汤低剂量组的逃避潜伏期缩短(P<0.05)。与西药组比较,涤痰汤高剂量组的逃避潜伏期缩短(P<0.05),涤痰汤低剂量组的逃避潜伏期无明显差异(P>0.05)。2.空间探索实验结果:与假手术组比较,模型组大鼠穿越原平台次数及停留时间明显缩短(P<0.01)。与模型组比较,涤痰汤高剂量组(P<0.01)和涤痰汤低剂量组(P<0.05)大鼠穿越原平台次数及停留时间明显增加,西药组穿越原平台次数及停留时间也明显增加(P<0.05)。与西药组比较,涤痰汤高剂量组穿越原平台次数及停留时间均明显增加(P<0.05),而涤痰汤低剂量组的穿越原平台次数及停留时间无明显差异(P>0.05)。3.HE染色:光镜下各组大鼠海马形态学观察与比较结果如下:假手术组大鼠海马CA1区锥体细胞形态规则而饱满、细胞数量多、边界清晰、层次分明、排列整齐而紧密、染色均匀,细胞核较大,呈类圆形,着色均匀,核仁清楚,细胞质丰富。模型组大鼠海马CA1区锥体细胞形态不规则、细胞边界模糊、排列紊乱而疏松,正常细胞数量减少,可见坏死的神经元,细胞膜、核膜不清晰,细胞核形态不规则,着色变浅,核仁固缩、深染,胞浆浑浊。涤痰汤高剂量组,涤痰汤低剂量组以及西药组的大鼠海马CA1区锥体细胞,与模型组比较,细胞形态规则、边界清晰、层次分明、排列整齐,正常细胞数量明显增多,坏死的神经元少,细胞核形态规则,核膜及核仁清楚,细胞质丰富。其中涤痰汤高剂量组在海马病理学改变上优于涤痰汤低剂量组和西药组。4.海马组织中NOX2的表达情况:与假手术组比较,VD模型组NOX2蛋白相对表达量明显增高(P<0.01);与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组以及西药组NOX2蛋白相对表达量降低(P<0.01,P<0.05,P<0.05);与西药组相比,涤痰汤高剂量组NOX2蛋白相对表达量明显降低(P<0.05),西药组与涤痰汤低剂量组NOX2蛋白相对表达量的差异不具有统计学意义(P>0.05)。5.海马组织中HO-1蛋白表达情况:与假手术组比较,VD模型组HO-1蛋白相对表达量明显增高(P<0.01);与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组以及西药组HO-1蛋白相对表达量均有增高(P<0.01,P<0.05,P<0.05);与西药组相比,涤痰汤高剂量组HO-1蛋白相对表达量增高(P<0.05),西药组与涤痰汤低剂量组HO-1蛋白相对表达量的差异不具有统计学意义(P>0.05)。6.海马组织ROS含量:与假手术组比较,VD模型组ROS表达量明显增高(P<0.01);与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组以及西药组ROS表达量降低(P<0.01,P<0.05,P<0.05);与西药组相比,涤痰汤高剂量组ROS表达量明显降低(P<0.05),西药组与涤痰汤低剂量组ROS表达量的差异不具有统计学意义(P>0.05)。7.海马组织GSH含量:与假手术组比较,VD模型组GSH表达量明显降低(P<0.01);与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组以及西药组GSH表达量升高(P<0.01,P<0.05,P<0.05);与西药组相比,涤痰汤高剂量组GSH表达量明显升高(P<0.05),西药组与涤痰汤低剂量组GSH表达量的差异不具有统计学意义(P>0.05)。8.海马组织中NF-кB的表达结果:与假手术组相比,VD模型组NF-кB表达量明显增高(P<0.01);与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组及西药组NF-кB表达量均下降(P<0.01,P<0.05,P<0.05);与西药组比较,涤痰汤高剂量组NF-кB表达量下降(P<0.05)。涤痰汤低剂量与西药组之间差异无统计学意义(P>0.05)9.海马组织TNF-α表达水平:与假手术组相比,VD模型组TNF-α表达量明显增高(P<0.01);与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组及西药组TNF-α表达量均下降(P<0.01,P<0.05,P<0.05);与西药组比较,涤痰汤高剂量组TNF-α表达量下降(P<0.05)。涤痰汤低剂量与西药组之间差异无统计学意义。(P>0.05)10.海马组织IL-1β含量检测结果比较:与假手术组相比,VD模型组IL-1β表达量明显增高(P<0.01);与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组及西药组IL-1β表达量均下降(P<0.01,P<0.05,P<0.05);与西药组比较,涤痰汤高剂量组IL-1β表达量下降(P<0.05)。涤痰汤低剂量与西药组之间差异无统计学意义。(P>0.05)11.海马组织IL-10含量检测结果比较:与假手术组相比,VD模型组IL-10表达量明显增高(P<0.01);与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组及西药组IL-10表达量均增高(P<0.01,P<0.05,P<0.05);与西药组比较,涤痰汤高剂量组IL-1β表达量增高(P<0.05)。涤痰汤低剂量与西药组之间差异无统计学意义(P>0.05)12.海马组织中mi R-124的表达情况:与假手术组比较,VD模型组mi R-124表达量明显降低(P<0.01);与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组以及西药组mi R-124表达量升高(P<0.01);与西药组相比,涤痰汤高剂量组mi R-124表达量的差异不具有统计学意义(P>0.05),西药组与涤痰汤低剂量组mi R-124表达量的差异具有统计学意义(P<0.05)。13.海马组织中BACE1的表达情况:与假手术组比较,VD模型组BACE1表达量明显增高(P<0.01);与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组以及西药组BACE1表达量降低(P<0.01,P<0.05,P<0.05);与西药组相比,涤痰汤高剂量组BACE1表达量明显降低(P<0.05),西药组与涤痰汤低剂量组BACE1表达量的差异不具有统计学意义。(P>0.05)14.海马组织中Aβ的表达情况:与假手术组比较,VD模型组Aβ表达量明显增高(P<0.01);与模型组比较,涤痰汤高剂量组、涤痰汤低剂量组以及西药组Aβ表达量降低(P<0.01,P<0.05,P<0.05);与西药组相比,涤痰汤高剂量组Aβ表达量明显降低(P<0.05),西药组与涤痰汤低剂量组Aβ表达量的差异不具有统计学意义(P>0.05)。研究结论:1.涤痰汤能显著改善VD模型大鼠的学习记忆能力和空间探索能力以及海马组织的病理损伤,以涤痰汤高剂量组治疗效果最为显著。2.涤痰汤可以通过抑制NOX2蛋白表达,促进海马组织HO-1蛋白表达,减少海马组织ROS的含量,增加GSH含量来缓解VD大鼠氧化应激损伤。其中以涤痰汤高剂量组治疗效果最为显著。3.涤痰汤可以抑制NF-кB,TNF-α,IL-1β的表达,促进IL-10的表达缓解VD大鼠的炎症反应。其中以涤痰汤高剂量组治疗效果最为显著。4.涤痰汤可以通过促进mi RNA-124的产生,从而抑制BACE1/Aβ发挥对VD大鼠的治疗作用。其中以涤痰汤高剂量组治疗效果最为显著。