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1、Twist1基因是1987年Thisse B等首先在果蝇中发现的一个新基因,它属于碱性的螺旋—环—螺旋(basic helix-loop-helix, bHLH)转录因子家族成员之一,进化过程中非常保守,在不同种属之间其核苷酸和氨基酸序列高度保守,在胚胎的发生发展中发挥重要作用。此外Twist1被认为是癌基因,影响肿瘤细胞凋亡,而且作为上皮间质转换(epithelial. Mesenchymal transition, EMT)过程中的关键调控因子,Twist1对肿瘤的侵袭和转移有重要影响、。Twist1可参与多种细胞的分化,包括肌细胞、软骨细胞、骨原细胞,并与心瓣膜的发育有关。Twist1的缺失或突变会导致尖头—并指畸形综合症。到目前为止,其促肿瘤作用及其与分化关系的报道多局限于实体瘤,在造血系统中鲜有报道。我们首先采用Real-time PCR方法检测了187例白血病患者(106例初治患者,9例治疗后CR患者),7例MDS患者,29例ITP患者及3例正常人骨髓,3例正常人外周血中Twist1基因的表达情况。CML、AML患者同ITP及正常人相比,Twist1表达明显升高(p<0.05)；ALL患者同ITP患者相比,Twist1表达量没有明显变化(p>0.05)。Twist1 mRNA表达水平与患者性别,年龄,外周血WBC,是否表达CD34抗原等均未显示出明显的相关性(p>0.05)。无论相对于正常人还是其他白血病类型,CML、AML患者均显示出了Twistl高表达趋势。AML患者中,M2,M3,M5患者的Twistl表达中位数显著高于ITP及正常人(p<0.05)。AML进展期患者表达中位数明显高于治疗后CR患者0.5540(0.0060-79.90) verse 0.0620 (0.0290-1.180),且差异具有统计学意义(p=0.0249)。将白血病患者Twist1表达水平与患者细胞遗传学异常进行综合分析,发现,伴有t(8；21)的M2患者中,Twist表达中位数0.0390(0.0270-0.7060)反而较正常人0.2250(0.002-2.803)有所降低(p>0.05),并显著低于AML-ETO阴性的M2患者0.0390(0.0270-0.7060),(p<0.05)。PML/RARa阳性患者表达中位数0.5785(0.0360-13.16),低于阴性患者表达(1.0070(0.0370-31.14),但差异不显著(p>0.05)。在M3患者中,初治患者Twist1 mRNA表达明显高于治疗后CR患者表0.6755 (0.0360-31.14) verse 0.1110 (0.0380-7.282),但没有明显统计学差异(p>0.05)。在CML患者中,BCR/ABL表达阳性患者的Twist1表达中位数0.5330(0.0290-9.349)明显高于BCR/ABL阴性患者0.8000(0.0060-29.34),并具有显著统计学意义(p<0.05)。由于大量临床标本的检测采用的是Real-time PCR方法测mRNA水平,是否代表蛋白水平表达尚不清楚。我们取7例ITP患者、7例ALL患者、8例CML患者、11例AML患者共33例病人的骨髓标本,用Real-time PCR和免疫组织化学方法同时检测Twist1在mRNA和蛋白水平的表达,并进行两者的相关性分析,结果显示Twist1在mRNA水平的表达和在蛋白水平的表达具有明显相关性(y=0.01959 x-0.1580,p=0.0211)。提示,Real-Time PCR检测Twist1 mRNA表达,完全可以代表蛋白表达水平。上述结果提示,Twist1可能在CML、AML尤其是在BCR/ABL阳性、AML-ETO阴性和PML/RARa阴性白血病的发生和发展中有重要的作用。2、在前期工作中我们发现,在K562细胞中转染mda-7/IL-24,可以使Twist1表达大幅度下降,而(?)nda-7/IL-24与细胞的分化有着密不可分的关系,在TPA诱导HL60、U937分化过程中mda-7/IL-24表达上调,并在TPA诱导分化中起重要作用。由于K562细胞高表达Twist1基因,为了研究Twist1与白血病细胞分化及mda-7/IL-24的关系,我们选取了K562细胞系用TPA诱导细胞分化,分别于24h、48h、72h用实时定量PCR和Western blot方法检测分化过程中(?)mda-7/IL-24与Twist1的表达情况,结果发现,TPA处理的K562细胞随着巨核系分化,出现mda-7/IL-24表达的大幅上调,同时,Twist1表达有下降趋势,提示mda-7/IL-24可能通过下调Twist1表达,促进TPA诱导的K562细胞分化。用siRNA干扰K562细胞中mda-7/IL-24的表达,同时加TPA处理,检测Twist1的表达,发现Twist1 mRNA表达下降,进一步证实了mda-7/IL-24与Twist1的关系。为进一步证明Twist1与分化的关系,我们构建了pcDNA3.1/myc-His (-) B-twist1重组质粒,转染K562细胞,筛选出表达Twist1的稳定细胞株,以期在过表达情况下研究Twist1与分化的关系。我们的工作首次证明,Twist1基因可能在白血病细胞分化过程中具有抑制作用,mda-7／IL-24可能是分化过程中Twist基因表达下调的机制之一