猪的病毒性疾病种类多、危害大，因此研发具有广谱抗病毒作用的猪干扰素制剂具有重大意义。为了更好地利用基因工程技术来开发重组猪干扰素制剂，防治猪病毒性传染病和进一步开展猪干扰素分子生物学研究，本文进行了猪α干扰素基因的克隆、表达及其重组蛋白抗伪狂犬病毒的研究。 根据GenBank己登录的猪α干扰素基因序列，设计了含EcoRI和KpnI酶切位点的一对引物，采取聚合酶链式反应(PCR)法，以猪肝DNA为模板进行了PoIFN-α的扩增。PCR产物经纯化回收后，克隆到pMD18-Simple T载体上，经序列测定证实克隆到猪α干扰素。将克隆质粒pMD-IFNα和pPICZαC质粒分别用EcoRI和KpnI双酶切，然后连接，转化大肠杆菌，得到重组表达质粒pPICzαc-IFNα。经酶切和测序鉴定，PoIFN-α成熟蛋白基因片段插入到表达载体pPICZαC启动子下，并形成正确的开放阅读框(ORF)。用Pme I单酶切pPICZαC-IFNα，电击转化感受态的毕赤酵母工程菌X33，最后涂布YPDS+ZeocinTM选择性培养基，置30℃温箱培养3～5天，结果获得多个单菌落。通过提高抗生素浓度，筛选出高抗性的转化子。先用BMGY培养基激活培养，离心后用BMMY培养基重悬菌体。每24小时添加一次甲醇，保持其终浓度为1.0％，诱导表达96小时后，收集菌液。取少量上清液进行SDS-PAGE电泳分析和Western-Blot鉴定。然后用细胞病变抑制法进行rPoIFN-α在BHK-21细胞上抗伪狂犬病毒粤A强毒株的实验。 实验结果表明，本研究克隆了猪α干扰素的成熟肽基因序列，全长约501bp核苷酸，编码166个氨基酸和一个终止密码子组成的成熟多肽；与GenBank中的PolFN-α基因比较，核苷酸同源性为97％～99.2％，氨基酸同源性为93.4％～97.0％。SDS-PAGE和Western-Blot分析，可见一条分子量约19.4KDa清晰蛋白条带，与理论值相符。抗病毒实验结果显示，rPoIFN-α对伪狂犬病毒在BHK-21细胞中早期增殖可呈现抑制作用，抗病毒活性为1.817×106IU/L。 结果表明，本实验成功地在毕赤酵母表达系统中分泌表达猪α干扰素并进行了rPoIFN-α抗伪狂犬病毒的研究。为基因工程生产rPoIFN-α奠定了基础。