巴戟天寡糖指纹图谱研究

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巴戟天为我国著名的“四大南药”之一,《中国药典》2005年版一部收载的巴戟天来源于茜草科植物巴戟天Morinda officinalis How的根,具有补肾阳、强筋骨、祛风湿功效,临床用于治疗阳痿遗精、宫冷不孕、月经不调、少腹冷痛、风湿痹痛、筋骨痿软等症。广东为巴戟天的道地产区,广西、福建、海南等地也有少量分布,全国绝大部分的商品巴戟天来源于广东。巴戟天含葸醌、环烯醚萜、寡糖、多糖等化学成分,其中寡糖类成分具有抗抑郁、免疫促进、抗应激、生精壮阳等作用,且含量较大。本研究在前人基础上,以巴戟天寡糖作为指标成分,对巴戟天进行研究。现将研究结果概述如下:第一部分文献研究查阅大量的巴戟天药材研究资源以及与本研究相关的资料,对巴戟天的本草考证、物种资料、栽培技术、化学成分、药理作用、质量控制等方面的研究及进展情况进行了总结。第二部分实验研究一、巴戟天种质资源调查对广东、广西、福建的巴戟天进行了栽培情况、生态学和种质资源调查,并收集了大量的巴戟天样品。结果表明,巴戟天在广东的栽培面积最大;在福建只有少量栽培,广西已基本没有栽培;巴戟天的生长对温、湿、光等因素有特定的要求:巴戟天虽然在各地均有栽种,但其种质主要来源于广东德庆。二、巴戟天常规理化性质测定根据《中国药典》2005年版一部规定,检查了巴戟天药材的水分(药典附录ⅨH第一法)、水溶性浸出物(药典附录ⅩA)、总灰分(药典附录ⅨK)、酸不溶性灰分(药典附录ⅨK)这4种理化性质指标。所收集样品基本符合药典规定,但各样品理化性质间存在较大差异。三、巴戟天寡糖类化学成分的高效薄层指纹图谱研究以果糖、蔗糖、蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖作为指标成分,通过考察不同薄层板、不同展开剂、不同显色剂、不同湿度、不同预饱和时间等因素,确定了巴戟天寡糖高效薄层(HPTLC)的最佳条件为:20 cm×10 cm硅胶GF254高效预制薄层铝板(美国Merck公司),按照《中国药典》2005年版一部薄层色谱法(附录ⅥB),吸取供试品溶液和巴戟天寡糖混合对照品溶液各0.2μL点于同一薄层板上,放置于干燥器中干燥12 h,以乙酸乙酯-甲醇-水-冰醋酸(12:3:2:3)为展开剂,在相对湿度47%的条件下,二次展开(展距均为8cm),取出,挥干溶剂,喷以α-萘酚-浓硫酸溶液,105℃加热1-2 min,日光下检视。四、巴戟天寡糖类化学成分的高效液相指纹图谱研究采用高效阴离子交换色谱-积分脉冲安培电化学法(HPAEC-IPAD),以蔗果三糖、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖作为指标成分,对巴戟天中寡糖类化学成分进行检测。根据国家食品药品监督管理局《中药注射剂指纹图谱研究技术指南》(暂行)、《中药注射剂色谱指纹图谱实验技术指南》(试行)和相关文献,通过指纹图谱方法学考察实验,确定了巴戟天寡糖高效液相指纹图谱的最佳色谱条件:色谱柱:Hemilton RCX-10阴离子色谱柱;流动相:A为100mM NaOH溶液,B为100mM NaOH, 500mM NaAc混合溶液。流速:0.8 m L·min-1进样体积:25μL,柱温:30℃;梯度洗脱:A:0-5min,90%;5-15min,90%-80%;15-30min,80%-50%;30-35min,50%:35-40min,50%-100%。从巴戟天寡糖高效液相指纹图谱,选取20个色谱峰作为巴戟天寡糖高效液相共有特征峰,并确定1号峰为果糖,2号峰为葡萄糖,3号峰为蔗糖,4号峰为蔗果三糖,6号峰为耐斯糖,7号峰为1F-果呋喃糖基耐斯糖。分别比较了广东省、福建省、广西壮族自治区、海南省巴戟天寡糖指纹图谱;广东省内不同地区巴戟天寡糖指纹图谱;商品巴戟天及其常见混伪品寡糖指纹图谱;巴戟天GAP基地不同生长年限及野生巴戟天寡糖指纹图谱;不同炮制巴戟天寡糖指纹图谱;巴戟天不同部位寡糖指纹图谱;不同直径大小巴戟天寡糖指纹图谱。实验结果为巴戟天药材质量评价体系的构建提供了有益参考。
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