论文部分内容阅读
HWTX-XI是从虎纹捕鸟蛛毒素中分离纯化得到的一种具有Kunitz型结构的丝氨酸蛋白酶抑制剂,分子量为6166.2Da,含55个氨基酸残基,其中6个半胱氨酸形成三对二硫键。HWTX-XI对于胰蛋白酶具有很强的抑制作用。本实验室建立了 HWTX-XI的酿酒酵母及毕赤酵母的表达系统,其产量可达25.6mg/ml。为了对表达的HWTX-XI的活性进行准确的鉴定,我们参照中国药典中关于抑肽酶比活性测定方法建立了 HWTX-XI及其突变体比活性测定的方法。测定发现表达的HWTX-XI及其突变体比活在4-5EPU/mg之间。急性胰腺炎是胰酶在多种非正常因素下被大量的激活引起胰腺组织水肿,自身消化,出血和坏死的炎症反应,并伴随有全身性的炎症反应和多器官衰竭(MOF),虽然最近几年医疗水平迅猛发展,但是急性胰腺炎的死亡率一直居高不下。开发出能够有效治疗急性胰腺炎的药物也一直是多年来科研工作者的夙愿,目前市场上销售的治疗急性胰腺炎的药物包括胰蛋白酶抑制剂(如乌司他丁,加贝酯),生长抑素及其衍生物(如善宁,奥曲肽),生长激素以及抗生素等。但由于急性胰腺炎发病急,机理复杂,某些药物获取困难,成本高昂,因此并无特别有效的治疗药物和治疗手段。本实验室在小鼠急性胰腺炎模型上证明了 HWTX-XI对急性胰腺炎具有很好的治疗效果。为了进一步验证HWTX-XI的疗效,我们摸索并建立了胆胰管逆行注射牛黄胆酸钠致大鼠急性胰腺炎的模型,并采用颈外静脉置管来进行给药。实验结果表明,HWTX-XI具有明显的缓解大鼠急性胰腺炎的效果,且呈现浓度依赖性,在给药量为4mg/kg时能够明显地降低急性胰腺炎大鼠血清淀粉酶,脂肪酶,IL-6,IL-10的水平,并有效地保护胰腺组织。在与同等剂量的抑肽酶的比较中,HWTX-XI也具有更好的治疗效果。另外,我们还做了大剂量的乌司他丁与HWTX-XI对大鼠急性胰腺炎治疗效果的比较研究,发现HWTX-XI具有更好的疗效。HWTX-XI在具有胰蛋白酶抑制活性的同时,对于电压门控钾通道也具有一定抑制活性,在整体动物水平表现出较弱的神经毒性。这对于HWTX-XI的药物开发前景来说是一个不利因素,因此本实验室在对比了 BPTI的氨基酸序列的基础上,对HWTX-XI做了分子改造,得到其突变体HWTX-XI-mut,并研究了它对L-Arg诱导小鼠急性胰腺炎模型的治疗效果,研究结果表明,HWTX-XI-mut能够有效的降低患急性胰腺炎小鼠血清淀粉酶,脂肪酶水平和胰腺组织病变程度。并算出EC50值分别为0.92mg/kg,1.23mg/kg,1.08mg/kg。综上所述,HWTX-XI及其突变体HWTX-XI-mut均对急性胰腺炎具有良好的治疗效果,是一个很有希望的治疗急性胰腺炎的候选药物。