【摘 要】
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目的:本研究旨在通过建立小鼠脑出血模型筛选出需要研究的目的基因:Nur77和mi RNA:mi R-224,继而在小鼠脑出血模型和体外BV-2细胞炎症模型验证Nur77、mi R-224在ICH后存在差异性表达,并证实调节mi R-224的表达后,可通过调节Nur77及炎症因子的表达变化从而调节炎性损伤,为脑出血后继发性炎性损伤的干预治疗提供新的治疗靶点。方法:1.构建小鼠脑出血模型,通过生物信息
【基金项目】
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国家自然科学基金（81660211、81960230）；
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目的:本研究旨在通过建立小鼠脑出血模型筛选出需要研究的目的基因:Nur77和mi RNA:mi R-224,继而在小鼠脑出血模型和体外BV-2细胞炎症模型验证Nur77、mi R-224在ICH后存在差异性表达,并证实调节mi R-224的表达后,可通过调节Nur77及炎症因子的表达变化从而调节炎性损伤,为脑出血后继发性炎性损伤的干预治疗提供新的治疗靶点。方法:1.构建小鼠脑出血模型,通过生物信息学分析及查阅文献,筛选出在小鼠脑出血中有差异性表达的目的基因:Nur77,通过Target Scan、mi RDB公共数据库对Nur77做上游mi RNA靶向预测,与脑出血模型中有差异性表达的mi RNA进行取交集后,得到目的mi RNA:mi R-224;2.建立小鼠脑出血模型,使用q RT-PCR法测定Nur77、mi R-224的相对表达量。3.在体外实验中,利用LPS处理BV-2细胞建成炎症模型后测定Nur77、mi R-224的相对表达量;予以mi R-224 mimic/inhibitor及相应的阴性对照分别处理BV-2细胞,使用q RT-PCR法测定Nur77、mi R-224及炎症因子的相对表达量。结果:1.通过高通量测序并予以生物信息学分析后得到545个下调m RNA和424个上调m RNA,55个下调mi RNA和51个上调mi RNA,通过查阅文献等得到所研究的目的基因:Nur77,并通过Target Scan、mi RDB公共数据库对Nur77做上游mi RNA靶向预测,与脑出血模型中有差异性表达的mi RNA进行取交集后,最终得到我们所研究的mi RNA:mi R-224。2.在小鼠脑出血模型中,第1天损伤侧脑组织中Nur77较正常组中Nur77的表达升高,第3天、第7天损伤侧Nur77的表达逐渐减低,第1天损伤侧脑组织中mi R-224较正常组中mi R-224的表达降低,第3天、第7天损伤侧mi R-224的表达逐渐升高;3.脂多糖（LPS）处理BV-2细胞,BV-2细胞形态发生变化,突触增多;炎症模型组中Nur77较对照组表达升高,mi R-224较对照组表达降低;4.利用mi R-224 mimic/inhibitor及其相应的阴性对照进行阳性转染处理BV-2细胞,通过q RT-PCR法发现mi R-224在mi R-224 mimic组的相对表达明显高于mimic NC组（P<0.05）,在mi R-224 inhibitor组的表达水平明显低于inhibitor NC组（P<0.05）;5.利用mi R-224 mimic/mi R-224 inhibitor及mimic NC/inhibitor NC分别处理BV-2细胞,再继续构建BV-2细胞炎症模型,结果提示LPS+mi R-224 mimic组与LPS+mimic NC组相比,Nur77的表达水平使显著降低（P<0.05）;促炎因子IL-6、TNF-α表达水平是显著降低（P<0.05）;抑炎因子IL-10表达水平是显著升高（P<0.05）;LPS+mi R-224inhibitor组与LPS+inhibitor NC组相比,Nur77的表达水平是显著升高（P<0.05）;促炎因子IL-6、TNF-α表达水平是显著升高（P<0.05）;抑炎因子IL-10表达水平是显著降低（P<0.05）。结论:在BV-2细胞炎症模型中,Nur77的表达较对照组升高,mi R-224的表达较对照组降低。mi R-224可能通过Nur77在小鼠脑出血炎症损伤调节作用中减轻炎症损伤。
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