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第一部分免疫学检测曲霉抗原及抗体在慢性肺曲霉病的诊断价值目的:评价免疫学检测曲霉抗原及抗体在诊断慢性肺曲霉病人群中的诊断价值。方法:收集2016年1月至2017年1月在广州医科大学第一附属医院和广州市胸科医院呼吸科住院符合慢性肺曲霉病(CPA)诊断标准患者的临床资料,同时收集患者血清、肺泡灌洗液(BALF),排除严重的免疫抑制的患者(例如艾滋病,中性粒细胞减少或器官移植术后),分别测定血清(1,3)-β-D葡聚糖(BDG),半乳甘露聚糖(GM),烟曲霉特异性Ig G抗体,烟曲霉特异性Ig M抗体,BALF-GM的水平,比较各种免疫学方法与诊断的一致性。比较各种免疫学诊断方法在CPA患者的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值。根据ROC曲线确定各免疫学诊断方法的最佳临界值。评价免疫学检测是否对患者治疗效果的评估是否有价值。结果:1、共纳入CPA组79例,对照组74例。CPA组分类:简单型曲霉球(SA)10例(12.66%),曲霉结节(NA)2例(2.53%),亚急性侵袭性曲霉病/慢性坏死性肺曲霉病35例(SAIA/CNPA)(44.30%),慢性空洞型肺曲霉(CCPA)28例(35.44%),慢性纤维化肺曲霉(CFPA)4例(5.06%)。CPA组63例确诊、16例临床诊断。CPA病例组平均年龄51.34±14.80岁,其中男性57例(72.15%),女性22例(27.85%)。对照组平均年龄55.23±14.57岁,男性48例(64.68%),女性26例(35.14%),CPA组最常见的基础疾病是支气管扩张(67.09%)和肺结核(65.82%)。咯血最常见的症状(44例,55.70%),影像学表现以空洞(69.62%)、曲霉球(39.24%)为主(P<0.05)。2、CPA组和对照组之间血清BDG,血清GM,烟曲霉特异性Ig M,烟曲霉特异性Ig G和BALF-GM均有显着差异(P<0.05)。血清G试验、血清GM、血清烟曲霉Ig M抗体、血清烟曲霉Ig G抗体、BALF-GM的灵敏度、特异度分别为49.36%、44.30%、17.72%、32.91%、45.57%和91.89%、98.64%、94.59%、90.54%、89.74%。单项诊断时,BALF-GM对CPA诊断价值较好,Youden指数为0.59(截点≥0.85μg/L),AUC=0.94(95%CI 0.89-0.99),最佳临界值为0.44μg/L(Sen 0.98,Spe 0.82)。3、血清BDG、GM在CPA组的各分型的灵敏度与总病例组相似。烟曲霉特异性Ig M抗体在CPA各分型的灵敏度均低。BALF-GM(截点≥0.65μg/L)在SA、CCPA、SAIA/CNPA、CFPA中的灵敏度为90.00%、71.43%、42.86%、75.00%。烟曲霉特异性Ig G抗体(截点≥80AU/ml)在SA、CCPA、SAIA/CNPA、CFPA的灵敏度分别为60.00%、57.14%、42.86%、50.00%。4、联合检测:血清BDG、GM、烟曲霉特异性Ig G抗体并联的灵敏度、特异度为76.19%、85.14%,血清BDG、GM、烟曲霉特异性Ig G抗体、烟曲霉特异性Ig M抗体并联的灵敏度和特异度分别为84.13%、78.38%。血清GM并联BALF-GM在CPA中的灵敏度、特异度为76.19%、93.24%。5、在抗曲霉治疗过程中,治疗有效的患者烟曲霉Ig G抗体水平下降,而该抗体上升可能提示预后不良。结论:1、免疫学检测在CPA患者有一定诊断价值。BALF-GM有较好的诊断价值,血清BDG、GM在CPA患者的灵敏度偏低,可能需要在该人群中下调诊断截点。2、免疫学检测在不同CPA分类可能有不同诊断价值。抗原、抗体联合检测可减少CPA漏诊,血清学最佳组合为血清BDG/GM/烟曲霉特异性Ig G抗体联合检测。BALF-GM联合血清GM可提高诊断灵敏度。3、烟曲霉特异性Ig M抗体在CPA诊断价值不高,烟曲霉特异性Ig G抗体在不同分类CPA中诊断价值不相同,下调截点可调高灵敏度。烟曲霉特异性Ig G抗体动态监测有助于CPA患者的预后评估。第二部分荧光定量PCR检测肺泡灌洗液中曲霉DNA在慢性肺曲霉病的诊断价值目的:评价荧光定量PCR检测肺泡灌洗液中曲霉DNA在慢性肺曲霉病的诊断价值。方法:患者入选标准同第一部分,收集患者的肺泡灌洗液(BALF),离心后取沉渣用于DNA提取。使用玻璃珠震荡+试剂盒提取BALF的DNA,使用荧光定量PCR(Taqman探针法)对肺泡灌洗液沉渣提取的DNA进行检测(BALF-QPCR)。结果:本实验收集140份肺泡灌洗液,按单次样本计算共128例,CPA组79例,对照组49例。其中CPA组63例确诊,16例临床诊断。BALF-QPCR在CPA组的灵敏度85.15%,特异度89.80%,阳性预测值96.63%,阴性预测值70.59%,Youden指数0.79,AUC=0.87(95%CI 0.80-0.94),P<0.005。其中,对确诊CPA诊断的灵敏度87.18%,特异度89.80%,阳性预测值95.77%,阴性预测值78.26%,Youden指数0.77,AUC=0.89(95%CI 0.82-0.95),P<0.005。BALF-QPCR与病理诊断有较好一致性(Kappa值0.766,P<0.005)。结论:BALF-QPCR在慢性肺曲霉病患者有较好的快速诊断价值,联合BALF-GM可减少假阳性。